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论文针对动物源性食品中甲硝唑及其结构类似物的非法添加,研究并建立了系统的酶联免疫检测方法。对于甲硝唑,从其结构类似物1-(2-氨乙基)-甲基-5-硝基咪唑二盐酸盐出发合成半抗原,通过戊二醛一步法使其咪唑环上的氨基直接与载体蛋白连接。从其本身出发合成半抗原采用了琥珀酸酐及氯乙酸乙酯法及Linker法。对于Linker法,选择牛甲状腺素蛋白作为载体蛋白并使其先与2,2-(乙烯二氧)双(乙胺)连接,接着使用甲硝唑与N-N二琥珀酰亚胺基碳酸酯连接,最后两者继续进行连接形成一个超长链完全抗原。对于琥珀酸酐及氯乙酸乙酯修饰半抗原法,采用琥珀酸酐连接法使甲硝唑与载体蛋白之间连接上一个7原子长度的链等。以上种种方法共制备出10种完全抗原。按照不同的免疫方案免疫新西兰大耳白兔,最后由戊二醛法制备的完全抗原得到高特异性和高灵敏度的多克隆抗体。利用混合酸酐法将由甲硝唑制备出的半抗原MSA与辣根过氧化物酶偶联制备酶标。通过优化包被抗体量、酶标稀释倍数、封闭液、缓冲液pH、发光底物溶液和发光酶标板,建立了直接竞争酶联免疫法与化学发光直接竞争酶联免疫法CLEIA。直接竞争酶联免疫法对甲硝唑的灵敏度(IC50)为0.30±0.04μg/mL,检出限(IC15)为0.036±0.003μg/mL。建立的CLEIA方法对甲硝唑灵敏度(IC50)为0.022±0.004μg/mL,检出限(IC15)为0.004±0.0003μg/mL。在直接竞争酶联免疫法中对于二甲硝基咪唑、替硝唑、奥硝唑的交叉反应率为194%、76%、115%,说明本文建立的方法除了可以检测甲硝唑兽药残留外,可以同时检测其他三种硝基咪唑类药物多残留。选择鸡肉、虾样品进行添加回收实验,样品被分别添加了浓度为1.2μg/g、6μg/g、20μg/g的甲硝唑,经过基质影响的消除后应用所建立的直接竞争酶联免疫法检测,回收率在58.54%到111.64%之间。本研究建立的两种检测方法灵敏度高,特异性好,适合多种禽类及水产品中甲硝唑及硝基咪唑类药物多残留的快速检测。