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目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)在强直性脊柱炎(AS)患者外周关节病变发病机制中的作用及其与疾病活动性的相关性。 方法：本实验首先将所有观察对象分为AS滑液组和AS滑膜组。在AS滑液组将有外周关节受累合并关节积液的活动性AS患者分类为AS外周关节组、将无外周关节受累并且病情稳定的AS患者分类为AS中轴关节组，共收集24例AS外周关节组患者关节液单个核细胞(SFMC)以及滑液、同时收集AS外周关节组患者24例、AS中轴关节组患者20例以及20名年龄性别与AS患者相匹配的健康人的外周血单个核细胞(PBMC)和血清；其中中轴关节组以及健康人分别作为疾病对照组和健康对照组。将PBMC及经脂多糖(LPS)刺激前后的SFMC，采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各观察对象SFMC／PBMC的VEGF mRNA表达，并与患者疾病活动性进行相关性比较；同时采用ELISA方法测定各观察对象关节液和血清中的VEGF(SF-VEGF／s-VEGF)，并与外周关节组SFMC VEGF mRNA表达光密度及疾病活动指标进行相关性分析。本研究同时对AS．患者的滑膜组织进行病理学、免疫组化以及原位杂交分析，其中将病程小于2年、经膝关节关节镜获取滑膜组织的患者分类为早期组[AS12例，类风湿关节炎(RA)10例后者作为疾病对照组]，将病程大于10年、经关节置换手术得到滑膜组织的患者分类为晚期组(其中AS12例均为髋关节滑膜，RA13例均为膝关节滑膜)。采用原位杂交以及免疫组化技术，对上述共计47例滑膜组织进行VEGF mRNA以及蛋白的检测，同时收集15例骨关节炎(OA)及5例因交通事故意外截肢的患者滑膜组织分别作为疾病以及健康对照组。关节镜下滑膜形态学评分方法由两位有经验的关节镜及风湿病学专家采用双盲方法参照Reece的评分方法，应用VAS=0-100mm(visual analog scale，VAS)对血管密度(vascular density，VD)、血管形态(vascular morphology，VM)、扭曲血管走行方式(tortuous vessels，TV)解放军军医进修学院博士学位论文中国人民解放军总医院摘要及直行血管走行方式(straight vessels，sV)进行评分;同样，滑膜增生(synovitlishypertr叩hy，SH)程度的评分也采取VAS(O一10omm)评分方法进行，分为几乎无滑膜增生、少有、有及滑膜肥厚4级。对滑膜组织VEGF的表达与部分实验室炎性指标进行相关性分析，对早期滑膜组织VEGF检测结果进一步与关节镜下滑膜形态学检查的、叭S评分进行相关性分析。结果:1.本研究建立了LPS对SFMC的刺激方法，并通过RT-PCR方法对AS患者外 周关节组SFMC进行VEGF mRNA表达的检测;经过LPS诱导刺激的SFMC VEGF mRNA的表达与未刺激的SFMC VEGF mRNA的表达相比差异显著，P <0.05;AS患者外周关节组未经LPS刺激的SFMC VEGF mRNA表达与临 床活动指标仅仅在CRP指标上呈现正相关性(r=0.42，P<0.05)，经过LPs 刺激的SFMC vEGFm胭A表达与Bath强直性脊柱炎疾病活动指数 (BASDAI)，外周关节肿胀数，SFVEGF， sVEGF显著正相关，P均<0.05。2.AS患者外周关节组SFVEGF水平与相匹配的sVEGF水平相比明显增高P< 0.005。AS患者外周关节组SFVEGF与SVEGF水平分布呈现正相关性(r二0，46， P<0.05);AS患者外周关节组的sVEGF水平较中轴关节组患者以及健康对 照组sVEGF水平相比明显增高，P<0.005;中轴关节组患者的SVEGF水平 较健康对照组sVEGF水平相比明显增高，P<0.005。3.AS患者外周关节组SFVEGF水平与BASDAI，外周关节肿胀数，LPS刺激后 的SFMC VEGF mRNA的表达(LPS一VEGF mRNA)以及外周血白细胞计数 (WBC)呈现显著正相关，P均<0.05。4.外周关节组的sVEGF水平与BASDAI、Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI)、 外周关节肿胀数、全身不适程度、血小板计数、LPS刺激后的SFMC VEGF mRNA的表达(LPS一VEGF mRNA)呈正相关，P均<0.05。5.早期AS及RA滑膜组织各层的VEGF mRNA，及蛋白表达的光密度均明显 高于OA以及对照组，血管周围的VEGF mRNA及蛋白表达的光密度在RA 组明显高于AS组，二者有统计学差异;早期RA血管周围VEGF蛋白表达解放军军医进修学院中国人民解放军总医院博士学位论文摘要 的光密度高于晚期RA组，早期AS瓜A组血管周围VEGF mRNA表达高于 晚期，有统计学差异，早期AS及RA滑膜组织各层VEGF mRNA与蛋白表 达有正相关性，P<0，05。6.滑膜组织各层VEGF表达与关节镜下滑膜形态相关性研究显示:AS滑膜衬 里层VEGF蛋白表达与血管形态、直行血管走行方式呈现正相关，P<0.05， AS血管周围VEGF蛋白表达与滑膜纤维素增生呈现正相关，P<0.05;RA 滑膜衬里层VEGF蛋白表达与血管形态、弯曲血管走行方式、血管密度呈正 相关性，P<0，05。‘7.早期/晚期滑膜各层VEGF蛋白表达与炎性指标之间相关性的研究显示:CRP 与早期AS滑膜衬里层、早期RA血管周围VEGF蛋白的表达呈现正相关， P均<0.05;血小板计数与早期RA滑膜衬里层和衬里下层基质组织及晚期 RA滑膜衬里下层基质组织VEGF蛋白的表达相关呈现正相关，P<0.05。结论:1.AS患者外周关节组SFMC表达VEGFmRNA，并且脂多糖可诱导其表达上调; 诱导刺激后A