[目的]　　 利用以细胞为靶标的指数富集配基的系统进化(CELL based Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment，CELL-SELEX)技术，筛选出与急性早幼粒细胞白血病(Acute Promyelocytic Leukemia，APL)NB4活细胞高亲和力高特异性结合的适配子，为荧光标记适配子快速鉴定APL检测方法的建立奠定基础。　　 [方法]　　 1.在体外构建两端为固定序列，中间为40个m的随机序列，全长76个nt的单链DNA(ssDNA)文库，以NB4细胞作为靶分子，进行CELL-SELEX筛选，同时利用流式细胞仪和荧光显微镜监控FITC-ssDNA次级库与NB4活细胞的结合过程。　　 2.从第二轮开始，每轮引入ssDNA次级库与急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)HL60细胞和慢性髓性白血病(chronicmyelogenous leukemia，CML)K562细胞相结合的反筛策略。　　 3.将结合率(bindingrate，BR)最高的第十六轮筛选产物进行扩增、纯化、TA克隆和测序，并用Dnaman软件分析预测其二级结构。　　 4.用流式细胞仪测定克隆适配子群与NB4活细胞的结合率，选出结合率最高的一个克隆适配子，利用GraphPad.Prism.v4.03软件进行亲和力分析。　　 5.采用TAMRA标记结合率最高的适配子，该适配子与三种白血病细胞相结合后，通过荧光显微镜验证其特异性。　　 [结果]　　 1.随着筛选轮数的增加，ssDNA次级库与NB4活细胞的结合率逐渐增加，第十六轮的结合率(19.9％)是第一轮结合率(1.6％)的12倍；十六轮以后，ssDNA次级库与NB4活细胞的结合率不再增加。　　 2.选取结合率最高的第十六轮筛选的克隆适配子群进行测序，发现21个克隆适配子序列中有3种不同序列，16个克隆子序列为：CX1，3个克隆子序列为：CX5，2个克隆子序列为：CX9，预测分析适配子的二级结构以茎-环结构为主。　　 3.克隆适配子CX1、CX5和CX9分别与NB4活细胞结合反应，流式细胞仪检测的结合率分别为：9.7％、12.6％、17.2％；适配子CX9结合率最高。　　 4.分析适配子CX9与NB4活细胞结合的亲和力，其解离常数(Kd)值低至16.2nM。　　 5.TAMRA标记的适配子CX9与NB4活细胞结合后，通过荧光显微镜可观察到明亮、数量较多的红色荧光，而与HL60和K562混合细胞结合后，未见明显的荧光信号。　　 [结论]　　 本研究经过十六轮CELL-SELEX筛选，获得针对NB4活细胞的ssDNA适配子，流式细胞仪和荧光显微镜分析表明筛选出的适配子CX9结合NB4活细胞具有高亲和力和高特异。高亲和力、高特异性针对NB4活细胞适配子的成功筛选，可为急性早幼粒细胞白血病的靶向诊治和基础研究奠定基础。