论文部分内容阅读
脑血管疾病是严重威胁人类健康的常见病、多发病，具有发病率高、致死率高、致残率高的特点。因此，研制治疗脑血管疾病的药物是我们面临的一个艰巨任务。YQ分针是我中心研制的新药，具有补气逐瘀、清热凉血的功效，主要用于治疗脑梗塞等脑缺血性疾病。我们首先通过体内及体外实验相结合的方法对YQ粉针进行配比筛选，从而确定了方中A药和B药的比例为1:1。同时为了验证其药效，并为临床用药提供依据，我们通过复制急性不完全性全脑缺血模型、局灶性脑缺血和局灶性脑缺血再灌注模型、大鼠微循环障碍以及实验性动脉血栓形成观察了其对脑梗塞的治疗效果，并通过观察其对血小板功能的影响、对炎性因子的影响及抗氧化性损伤的程度对YQ粉针治疗脑梗塞的作用作初步探讨。
1.配比筛选实验：通过小鼠肺栓塞实验及家兔离体血小板聚集实验，探讨YQ粉针剂中A药与B药的最佳剂量配比及其配伍的合理性。实验结果表明，5号配伍组(A1.0g生药/ml+B1.5g生药ml)在上述体内、体外实验中均优于其它各配比组及单味药组。因此，我们认为YQ粉针的最佳配伍比例(生药比)为A:B=1:12.对大鼠局灶性脑缺血再灌注的影响：采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，探讨YQ粉针剂对模型大鼠行为学评分、脑梗塞范围、脑含水量、脑指数、血液流变性及凝血指标的影响。实验结果表明：静脉注射YQ粉针剂2.0g/kg、1.0g/kg可明显改善造模后行为学障碍；降低MCAO大鼠脑梗塞率、脑含水量、脑指数，同时YQ粉针剂还能降低模型大鼠的全血粘度及血浆粘度，延长TT、PT、APTT时间。提示YQ粉针剂对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有保护作用。
3.对大鼠局灶性脑缺血的影响：采用电凝大鼠一侧中动脉制备大鼠局灶性脑缺血模型，探讨YQ粉针剂对模型大鼠行为学评分、脑梗塞范围、脑含水量、脑指数、血液流变性及血浆中纤维蛋白原的影响。实验结果表明，YQ粉针剂可明显改善造模后行为学障碍；降低局灶性脑缺血大鼠脑梗塞率、脑含水量、脑指数，同时YQ粉针剂还能降低模型大鼠的全血粘度，降低模型大鼠血浆中纤维蛋白原的含量。提示，YQ粉针剂对局灶性脑缺血具有保护作用。
4.对脑血流量的影响：采用静脉注射15％高分子右旋糖酐的方法复制脑微循环障碍模型，观察YQ粉针剂对大鼠脑血流量的影响。实验结果表明，YQ粉针剂2.0g/kg、1.0g/kg能够显著增加脑微循环障碍模型大鼠的脑血流量，提示YQ粉针可以通过增加脑血流量来改善脑微循环障碍。
5.对实验性动脉血栓的影响：通过电刺激的方法制备大鼠实验性体内血栓模型和小鼠肺栓塞模型，观察YQ粉针对实验性动脉血栓的影响。实验结果表明，YQ粉针剂各剂量均能明显延长大鼠实验性体内血栓形成的时间，缩短小鼠肺栓塞的恢复时间。提示YQ粉针剂具有抗动脉血栓形成的作用。
6.对血小板聚集功能的影响：通过对大鼠在体血小板聚集和家兔离体血小板聚集的测定，观察YQ粉针剂对血小板聚集功能的影响。实验结果表明YQ粉针剂静脉注射可以明显抑制局灶性脑缺血再灌注大鼠及局灶性脑缺血大鼠血小板的聚集，并且YQ粉针剂还可以明显抑制ADP、从、PAF诱导的家兔离体血小板聚集，其半数抑制浓度分别为162.12mg生药/ml、82.38mg生药/ml、300.45生药mg/ml。提示YQ粉针剂具有抑制血小板聚集的作用。
7.对脑缺血再灌注大鼠脑组织ICAM-1、TNF-α表达及血浆IL-6含量的影响：采用免疫组化的方法观察ICAM-1、TNF-a在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织内的表达，采用ELISA法检测局灶性脑缺血大鼠血浆中IL-6的含量。YQ粉针剂能够明显减少模型大鼠脑组织中ICAM-1阳性血管数，降低模型大鼠脑组织TNF-a的阳性细胞数，还能降低永久性大脑中动脉阻断模型大鼠血浆中IL-6的含量。提示YQ粉针剂可以抑制大鼠脑缺血再灌注损伤时炎症细胞因子的表达，减少白细胞的浸润，降低脑缺血再灌注损伤的程度。
8.对血栓素(TXB2)、前列环素(6-K-PGF1α)、内皮素(ET)的影响：采用放射免疫的方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆中TXB2、6-K-PGF1α、ET的含量。实验结果表明YQ粉针剂能够明显降低TXB2的含量，升高6-K-PGF1a的水平，对ET含量影响不大。提示YQ粉针剂可以通过调节TXB2/6-K-PGF1a比例失调从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。
9.对局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆中SOD、MDA、NO、NOS等指标的影响：YQ粉针剂能够明显降低模型大鼠血浆中MDA、NO、NOS的水平，提高SOD的活性。提示YQ粉针剂能够通过抗氧化自由基的作用减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。
10.对原代培养皮层神经元Ca2+超载的影响：体外进行原代大鼠皮层神经元的细胞培养，利用KCl复制Ca2+超载损伤模型，通过形态学观察、MTT法染色以及对细胞上清中SOD活力及MDA含量来研究YQ粉针剂对皮层神经元的保护作用。结果表明：YQ粉针剂不但可以抑制KCl引起的细胞缺氧损伤，而且还能够降低损伤模型中MDA含量，提高SOD的活性减轻细胞损伤。提示YQ粉针剂对皮层神经元具有保护作用。