用莱茵衣藻表达外源蛋白的研究

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongjiansu
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衣藻是一种单细胞真核绿藻,素有“绿色酵母”之称。而且,莱茵衣藻是目前唯一核、叶绿体和线粒体三套基因组均能遗传转化的植物。随着衣藻细胞生物学和分子生物学研究的不断深入,衣藻已成为当今分子生物学、分子遗传学模式生物。本篇论文中在衣藻中表达的三个基因atzA、CKX及IL6,他们分别编码阿特拉津氯水解酶,细胞分裂素氧化酶和白细胞介素-6。国内外尚无相关文献报道。   本文构建了四个细胞核转化载体,即:pGenD-atzA,pGenD-CKX,pCB740-atzA和pCB740-CKX。通过玻璃珠搅拌法进行转化,其中pGenD-atzA和pGenD-CKX分别与pARG7.8共转化衣藻CW15(Arg-),在不含精氨酸的培养基上筛选,在得到的转化子中,获得了3个PCR阳性的atzA转化子,没有检测到PCR阳性的CKX转化子。pCB740-atzA和pCB740-CKX的转化仍在进行中。   对于共转化得到的atzA转化子进行阿特拉津处理,结果表明无论是在固体培养基上还是液体培养基中,与野生型相比,转化子均表现较高的阿特拉津抗性。但是提取转化子的RNA作RT-PCR却没有得到特异性的条带,说明转入的atzA基因转录水平很低或者根本没有转录,因此,由于基因的随机插入引起抗阿特拉津的突变的可能性尚不能排除。   另外,本文还构建了两个叶绿体转化载体p72-psbA-IL6-aphA6和p72-psbA-CKX-aphA6,通过基因枪转化衣藻137CC后,在含有50mg/L卡那霉素的筛选培养基上筛选,分别得到了一个IL6转化子和37个CKX转化子,其中IL6转化子经抗性继代筛选后,通过PCR鉴定和RT-PCR鉴定,证实IL6基因已经整合到衣藻的叶绿体基因组中并成功转录,但是用SDS-PAGE电泳-银染技术没有检测到IL6蛋白。CKX转化子仍在鉴定之中。  
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