【摘 要】
：
目的研究雌激素（Estradiol,E2）对雌激素受体（Estrogen receptor,ER）阳性乳腺癌细胞MCF-7的干细胞特性和上皮-间充质转化（Epithelial–mesenchymal transition,EMT）的影响以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的介导作用。方法1.用Western blot检测雌激素受体α（Estrogen receptor Alpha,ERα）在乳腺
论文部分内容阅读
目的研究雌激素（Estradiol,E2）对雌激素受体（Estrogen receptor,ER）阳性乳腺癌细胞MCF-7的干细胞特性和上皮-间充质转化（Epithelial–mesenchymal transition,EMT）的影响以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的介导作用。方法1.用Western blot检测雌激素受体α（Estrogen receptor Alpha,ERα）在乳腺正常上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞系中的表达。2.用Mammosphere形成实验富集乳腺癌干细胞（Breast cancer stem cell,BCSCs）;用荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）和Western blot检测BCSCs相关干性基因和蛋白的表达。3.CCK-8法筛选E2对MCF-7细胞的最适作用浓度;用qPCR和Western blot验证E2对BCSCs相关干性基因和蛋白表达的影响;用Mammosphere形成实验观察E2对所富集的BCSCs的影响;流式细胞术观察E2对BCSCs中乙醛脱氢酶1（Acetaldehyde dehydrogenase1,ALDH1+）比例的影响。4.划痕实验和细胞克隆形成实验检测E2对MCF-7细胞迁移和增殖能力的影响;qPCR和Western blot检测E2对MCF-7细胞EMT相关基因和蛋白表达的变化。5.划痕实验和细胞克隆形成实验检测雌激素拮抗剂Fulvestrant对MCF-7细胞迁移和增殖能力的影响;Western blot分别检测对照组（CT）,E2处理组,E2+Fulvestrant处理组EMT相关蛋白及Ras/Raf和PI3K/AKT通路蛋白的表达情况。6.qPCR和Western blot检测E2对MCF-7细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路基因和蛋白表达的变化。7.Mammosphere形成实验观察AKT抑制剂MK-2206对所富集的BCSCs的影响;Western blot检测E2、MK-2206及E2+MK-2206处理组相比较于CT组的干性相关蛋白,PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白,EMT相关蛋白的表达。结果1.ERα在ER阳性乳腺癌MCF-7细胞中表达量最高,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.与乳腺癌细胞相比,BCSCs干性相关基因和蛋白ABCG-2、nanog、Oct-4的表达显著上调（P<0.05）。3.经CCK-8筛选确定E2作用于MCF-7细胞的最适条件为:48h,10n M;在10n M浓度下,BCSCs干性相关基因和蛋白ABCG-2、nanog、Oct-4的表达显著升高（P<0.05）;E2促进BCSCs的体外成球能力,表现为微球体体积增大及数量增加;流式细胞术显示,与CT组相比,E2组所富集的BCSCs中ALDH1+细胞比例显著增多。（P<0.01）。4.与CT组相比,E2处理组MCF-7细胞迁移愈合率和克隆形成率均增高;与CT组相比,E2处理组EMT相关基因及蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug、Snail、ZEB1的表达均升高（P<0.05）,E-cadherin的表达降低。5.与CT组相比,Fulvestrant处理组MCF-7细胞迁移愈合率和克隆形成率均降低;与CT组相比,E2+Fulvestrant处理组EMT及通路相关蛋白Vimentin、Slug、Snail、Ras、Raf、PI3K和AKT的表达显著降低（P<0.05）。6.与CT组相比,E2处理组通路相关基因PI3K、AKT、mTOR的表达增高,PI3K、AKT、mTOR、p70S6K、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、P-p70 S6K的蛋白表达显著升高（P<0.05）。7.与CT组相比,MK-2206能够明显抑制BCSCs的体外成球能力,表现为微球体体积减小及数量减少,减弱了BCSCs的自我更新能力。干性相关蛋白ABCG-2、nanog、Oct-4的表达下调;通路相关蛋白AKT、mTOR、p70S6K、P-AKT、P-mTOR和P-p70S6K的表达降低（P<0.05）;EMT相关蛋白N-cadherin、Vimentin、Slug、Snail的表达降低（P<0.05）,E-cadherin的表达升高。结论E2具有诱导促进MCF-7细胞中BCSCs表达的作用。E2通过活化PI3K/AKT/mTOR信号通路促进MCF-7细胞的EMT转换。E2通过活化PI3K/AKT/mTOR信号通路,增强MCF-7细胞中BCSCs的干性表达。
其他文献
目的1.探讨慢性锁骨下动脉闭塞患者介入再通治疗的必要性、可行性、安全性、有效性。2.探讨慢性锁骨下动脉闭塞患者不同形态学分型对介入再通治疗的成功率和安全性的影响。方法回顾性分析2014年1月-2020年7月就诊于宁夏医科大学总院慢性锁骨下动脉闭塞患者介入再通治疗的临床资料,包括人口学统计特征、血管危险因素、介入再通治疗技术成功率、围手术期并发症及随访情况。结果共收集病例23例,其中男性16例（69
目的探讨羟基脲（HU）联合替莫唑胺（TMZ）和放疗（RT）对人脑胶质瘤U251细胞的放化疗敏感性的影响,并探究其可能机制。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,将实验分为空白对照组（Ctrl）、单纯HU组、CRT组（RT+TMZ）、HU+CRT组（HU+RT+TMZ）四组,其中行克隆形成实验绘制细胞细胞生存曲线时分组为RT组和HU+RT组共两组。采用CCK8细胞增殖与毒性检测实验检测不同浓度HU/
目的探讨SCLC的影像学特征及临床特点,总结SCLC的影像学分型对SCLC的诊断意义,并分析其临床研究特点从而可以有助于SCLC的早期诊断、鉴别诊断与个体化治疗。方法收集2015年1月-2020年1月就诊我院确诊为SCLC的患者的病例信息（包括胸部增强CT的影像学表现、病例特点、病理资料及肿瘤标记物及诊断手段及治疗。）结果本研究138例SCLC患者,男性与女性分别为98例（71.0%）和40例（2
目的此研究以慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者为研究对象,干预措施为家庭肺康复,包括康复教育（COPD疾病管理）+康复训练（呼吸肌锻炼+四肢肌肉耐力锻炼）,观察家庭肺康复对患者的症状、肺功能及其运动耐力、生活质量、急性加重及炎症指标的影响。方法将符合标准的COPD患者采用抛掷硬币法分为对照组（22例）和观察组（23例）。对照组:吸入药物:布地奈德福莫特罗160ug/4.5ug（信必可都保）1吸/次一
目的通过分析肥厚型心肌病（Hypertrophic cardiomyopathy,HCM）的临床资料、影像学资料及心电学特点,探讨梗阻性肥厚型心肌病（Obstructive hypertrophic cardiomyopathy,OHCM）与非梗阻性肥厚型心肌病（Non-obstructive hypertrophic cardiomyopathy,NOHCM）及不同肥厚部位HCM临床及心电生理学
目的回顾性分析类风湿关节炎（RA）合并冠状动脉粥样硬化性心脏病（CHD）的临床特点,提高对RA合并CHD的认识,为此类疾病诊治提供借鉴。方法收集宁夏医科大学总医院医院2011年6月-2019年8月住院明确诊断为RA合并CHD患者129例,选取同期住院明确诊断为RA且未合并CHD的患者286例,收集记录患者的各项临床资料、实验室、影像学指标及既往用药情况,采用logistic回归分析,探讨RA患者合
目的为了探讨滤泡辅助性T细胞（Follicular helper T cells,Tfh）在1型糖尿病（Type1 diabetes mellitus,T1DM）的作用,以及氧化苦参碱（oxymatrine,OMT）对胰岛β细胞的保护作用及其发挥作用的分子机制。本研究以T1DM患者和非肥胖型糖尿病小鼠（NOD/Lt J）模型为研究对象,收集T1DM患者临床实验室检查指标,检测T1DM患者外周血Tf
目的 基于中国古典哲学系统发生同构律对“和”思想进行系统性同构律研究;以“和”的同构律为指导,研究“和”思想在中医学理法方药中的具体应用。方法 本文运用的相关研究方法,重点突出了如下三法:文献研究法、数学研究法和中医个案研究法。文献研究法重点对中国古典哲学“和”思想进行系统性文献梳理;数学研究法重点从同构律数学公式,尤其以“四象三元”为数学规律演化模版,对“和”发生学的数理研究;中医个案研究法重点
研究背景DNA损伤的累积是导致细胞癌变的重要影响因素[1-2],与癌症早期的发生密切联系。DNA损伤修复相关基因,被称为肿瘤三大基因之一,共同存在于正常的细胞中,参与调节细胞正常的生长、分化和增殖。有报道表明DNA损伤修复基因异常[3-5],与恶性肿瘤的演变、侵袭以及对放化疗抵抗等均有着密切关联。锌指蛋白146（Ring Finger Protein 146,RNF146）是一种与DNA损伤和修复
目的探讨热暴露下大鼠胸主动脉结构变化及胸主动脉内皮细胞（Rat Thoracic Aortic Endothelial Cell,RTAEC）的钟基因BMAL1和细胞周期蛋白表达水平的改变。方法体内实验:选用雄性Sprague Dawley（SD）大鼠20只,随机分为:对照组和热暴露组。对照组环境温度为24℃,15d。热暴露组环境温度为32℃,15d。记录大鼠体重、血压和体温的变化,HE染色观察热