【摘 要】
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嗅觉对于昆虫寻找寄主植物、配偶和栖息场所等行为活动至关重要。其中,一些生理学和行为学实验已证明气味结合蛋白是昆虫嗅觉感受机制中的第一步生化反应。近年来,桃蛀螟已成
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嗅觉对于昆虫寻找寄主植物、配偶和栖息场所等行为活动至关重要。其中,一些生理学和行为学实验已证明气味结合蛋白是昆虫嗅觉感受机制中的第一步生化反应。近年来,桃蛀螟已成为农林生产上的重要害虫之一,对其气味结合蛋白进行研究可以更好地干扰昆虫对外界气味分子的识别,进而达到对桃蛀螟有效防治的目的。本文采用高通量测序技术获了桃蛀螟触角转录组数据,通过生物信息学方法鉴定嗅觉相关基因。我们利用荧光定量PCR的方法对测序结果进行验证,同时对桃蛀螟PBP1的气味功能进行了研究。主要研究结果如下:1.利用转录组测序技术,共获得101366个转录本,其中,总长度116001455bp,平均长度1144 bp;运用paired-end joining和gap-filling技术进一步拼接得到47109个Unigene,基于5个数据库(NR,Swiss-Prot,GO,COG和KEGG)进行相似性比对,共有18990个unigenes被注释。2.利用生物信息学的方法筛选并鉴定到若干个与嗅觉相关的基因,主要包括15个气味结合蛋白基因、46个气味受体基因和7个离子型受体。3.以FDR≤0.05且p-value≤0.05为阈值时,检测桃蛀螟雌雄触角差异转录本有1308个,其中上调表达基因有759个,下调表达有549个,包括3个气味结合蛋白及7个气味受体。我们选择嗅觉蛋白相关基因表达的unigenes,用qRT-PCR验证了桃蛀螟雌雄触角的表达量,结果显示这些基因的qRT-PCR结果与DEG数据相一致。4.克隆、表达及纯化了一个桃蛀螟性信息素结合蛋白Cpun-PBP1,利用荧光竞争结合试验测定CpunPBP1蛋白与16种配基化合物的结合能力(荧光探针为1-NPN)。结果显示,Cpun-PBP1不但能与性信息素组分(顺-10-十六碳烯醛和十六醛)结合,结合常数为7.32和9.39 μmol/L;还能与8种寄主植物挥发物结合,其中结合能力最强的是莰烯,结合常数为3.76μmol/L。
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