文昌鱼和斑马鱼C1q、C3及G10的进化分析及基因表达的研究

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补体系统是由存在于动物血清与组织液中的一组可溶性蛋白及存在于其它细胞表面的一组膜结合蛋白和补体受体所组成。根据功能可将补体系统分为三类:第一类是存在于体液中参与补体激活酶促连锁反应的固有成分,包括九种补体(C1~C9)及D、B、P因子。第二类是补体活化的调节分子,其中存在于体液中属于可溶性蛋白分子的有:C1酯酶抑制剂、C4bp、I因子、S蛋白等;存在于细胞表面的膜结合蛋白分子有:膜辅因子、促衰变因子和同种限制因子等。第三类是存在于细胞表面介导补体活性片段或调节蛋白发挥生物效应的各种受体,如C1q受体、C3b/C4b受体、H因子受体、C3a和C5a受体等。补体系统在体液中以非活性状态存在,当其被激活物激活后,发生连锁的酶促反应,表现出其生物活性。补体系统是机体非特异性免疫的重要组成部分,同时也参与特异性免疫,其主要作用如下:①溶菌和溶细胞作用;②促进中和溶解病毒作用;③调理和免疫粘附作用;④炎症介质作用。 补体C3是人体免疫血清中含量最丰富的补体蛋白,由α链和β链组成。α链和β链之间以单个二硫键和非共价键结合。C3是一个多功能的蛋白,它可以与大量的补体因子和非补体因子相互作用。C3在经典途径和替代途径中均占重要地位。它是激活效应扩大的主要因子,是补体系统的核心组分,位于三种激活途径的交叉点。 C1q是经典补体途径的目标识别蛋白。人类的C1q由18个多肽(6A,6B,6C)组成:A链,B链和C链。C1q可以通过它的三聚体gC1q功能域广泛的结合自我和非我的配体,从而引发经典途径。在无脊椎动物和低等的脊椎动物中,C1q是以凝集素的方式参与机体的免疫反应的。 本文对文昌鱼C3进行了基因进化分析和基因组结构分析,并研究了文昌鱼C3在成体组织中的表达模式。研究发现,文昌鱼C3与其它物种C3的的同源性大约在25%-30%之间。虽然文昌鱼与文中所列物种的同源性并不高,但它们都含有“RRRR”结构域和“CC--C--C--CC”为特征的C3a过敏毒素区结构域。在哺乳动物之间,C3的同源性相对比较高,这说明进化到哺乳动物后C3的差异性变小,一致性变高了。在进化上,文昌鱼C3位于无脊椎动物和脊椎动物C3的过渡位置,与文昌鱼本身在动物进化过程中的地位基本一致。基因结构分析显示,人、小鼠和斑马鱼C3基因都包含41个外显子和40个内含子,并且每个外显子的大小几乎完全相同。文昌鱼C3基因包含40个外显子和39个内含子,文昌鱼的第22个外显子大小相当于斑马鱼的第22个和23个外显子之和,它的第23和24个外显子之和的大小相当于斑马鱼的第24个外显子,第39个外显子大小相当于斑马鱼第39个和40个外显子之和。其它外显子大小基本上与人、小鼠和斑马鱼的外显子大小一致。 成体原位杂交结果显示,C3在中央管附近的神经元、咽鳃区轮器的上皮细胞、体腔内巨噬细胞、鳃片纤毛柱状上皮细胞、肠道、卵巢、精巢、腹褶的表皮细胞和腹褶淋巴腔的巨噬细胞中均有表达。在内柱中,C3则只检测到微弱的信号。 C3的保守序列及表达模式表明C3可能参与了文昌鱼的免疫应答,在文昌鱼的免疫反应中起了重要作用。 C1q-like在文昌鱼胚胎发育和成体组织中的表达模式。原位杂交结果显示,C1q-like在胚胎发育过程中均有表达。随着发育的进行,C1q-like在预定的脊索中胚层,轴旁中胚层,发育中的神经板和分化中的消化道中均有表达,之后在发育中和新形成的脊索、体节、肠壁中表达。到了幼虫期,主要在消化道、鳃和分化中的尾芽中表达。在成体组织中,C1q-like与C3在文昌鱼中的表达模式非常相似,但在内柱中,C1q-like的表达非常强烈。 对比研究发现,斑马鱼中C1qc、C3在斑马鱼成体组织中的表达模式分别与文昌鱼的C1q-like、C3的表达模式非常相似,主要在卵母细胞、视网膜、脑、肝脏和肠道中表达。这表明C1q和C3在文昌鱼及斑马鱼中的功能可能是相似的。 G10蛋白是首先发现于爪蟾卵母细胞中的一种母源性的物质。小鼠G10蛋白与爪蟾G10蛋白的同源性高达93%。Timothy Hla等在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中发现了爪蟾G10的同源蛋白,与爪蟾G10蛋白的同源性是93%。它在上皮细胞和间叶细胞系中无所不在。G10是高度保守的,在非常低等的生物如酵母和线虫中都有表达。 利用本实验室提交的文昌鱼G10序列进行了进化学分析和基因组学分析以及在文昌鱼胚胎和成体组织进行了原位杂交检测。结果显示,文昌鱼G10的进化地位位于无脊椎动物和脊椎动物之间,符合文昌鱼本身的动物进化地位。原位杂交结果显示,AmphiG10在胚胎发育的各个时期均有表达。随着发育的进行主要在分化中的外胚层和中胚层表达。之后主要在表皮、体节、消化道、逐渐形成的神经管和脊索中表达。之后,主要在消化道和鳃的上皮中表达。G10在成体组织中的表达模式与C1q-like和C3非常相似。在斑马鱼中,G10的表达模式与C1q-like和C3的表达也是惊人的相似,只是在视网膜中未检测到表达信号。G10可能参与了生物体的免疫活动。
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