【摘 要】
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该研究通过前期建立的鲨鱼肝部分切除再生模型获得鲨鱼正常和再生24h的肝组织总RNA,利用差异显示反转录聚合酶链式反应(Differential Display Reverse Transcription PCR,DDR
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该研究通过前期建立的鲨鱼肝部分切除再生模型获得鲨鱼正常和再生24h的肝组织总RNA,利用差异显示反转录聚合酶链式反应(Differential Display Reverse Transcription PCR,DDRT-PCR)技术,对鲨鱼肝脏再生过程中的差异表达基因进行了分析,从中获得了190余种差异表达的基因片段,其中28种是鲨鱼肝脏再生过程中特异表达的基因片段,52种在鲨鱼肝脏再生过程中表达上调,112种表达下调,它们可作为鲨鱼肝脏再生的表达序列标签(Expressed Sequence Tags,EST),以这些EST序列作为探针,将能从我们研究小组已构建的鲨鱼再生肝组织的cDNA文库中获得这些差异表达基因的cDNA全序列.现已完成对其中16种差异表达基因片段的克隆和序列分析工作,将它们与GenBank中的EST数据库进行了Blast分析,发现其中1种基因与褐鼠IL-6基因在核苷酸水平上具有高度的同源性(510nt/510nt,100﹪),因其来源于鲨鱼,将其命名为sIL-6,这是在海洋生物体内首次发现和报道的IL-6基因;已有大量的数据显示来自于人或大鼠的IL-6可明显促进肝细胞的增殖,在肝再生过程中起着重要的调节作用,我们实验结果表明鲨鱼肝再生过程中sIL-6基因表达上调,与文献报道相符.其它15种差异表达基因片段为未见报道的序列,与Genbank中报道的已知基因或功能未知基因的同源性极低,利用ORF Finder软件分析它们的开放阅读框架,或通过RACE-PCR技术及文库筛选技术获得它们的cDNA全序列,构建其基因工程菌株以获得重组产物,进一步研究其生物活性和功能,将为肝再生相关新功能基因及其产物的发现以及对肝脏再生机理的认识提供了更多的信息.现已分析其中两个基因的ORF(GenBank登录号:AY599224,AY599225),并构建了该基因的原核表达载体质粒,转化大肠杆菌BL21菌株后获得了其基因工程菌株.
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