苜蓿(Medicago sartva L.)是豆科多年生草本植物,在全世界范围内广泛种植,被誉为“牧草之王”。苜蓿具有草产量高、营养丰富、易栽培等特点,作为饲料对畜牧经济发展有重要意义。杂种优势是存在于一切生物中的一种普遍现象,指杂交子代在生长活力、育性或种子产量等方面都优于双亲均值的现象。因此,杂种优势利用对增加牧草产草量及其品质有重要意义。杂种优势利用是培育苜蓿新品种的一种途径,培育新品种对饲料满足畜牧经济发展有积极作用。杂种优势利用是建立在亲本基因型纯合且一致的基础上,因此紫花苜蓿杂种优势利用首先要获得遗传纯合且一致的亲本。目前,常用于于培育遗传纯合且一致的亲本的育种方式是通过多年连续自交育种。但苜蓿为同源四倍体植物,亲本纯合速度比二倍体慢的多;并且苜蓿具有自交不亲和特性,很难获得自交系。这两个原因限制了苜蓿杂种优势在生产上的运用。为了突破紫花苜蓿杂种优势利用中基因不纯合、育种年限长等问题,利用花药离体培养技术,通过花药和花粉培养诱导培育的单倍体植株,然后对染色体加倍可获得基因纯合且一致的亲本,成为解决紫花苜蓿杂种优势利用问题的一种新途径,缩短了育种周期,培育山符合育种目标的品种,提高育种效率。本研究以品种“渝苜一号”的三个高频再生株系为花药供体材料,研究了变温预处理、离心预处理、高渗预处理以及不同的处理组合对苜蓿花药诱导、分化、再生的影响,建立了苜蓿花药培养高效再生技术体系。本试验的土要结果如下:1.对三个株系的花药进行变温预处理,都能显著提高花药愈伤组织诱导率。12号株系的愈伤诱导率为9.33%,15号株系为22%,78号株系为9.33%,诱导效率分别比对照高出75.05%、65.05%和180.18%,均达显著水平。2.对三个株系的花药进行高渗处理,不同基因型产生的效果不一样。12号株系和78号株系的花药愈伤率得到提高,最高分别到达9.33%和5.33%,诱导效率分比对照高出75.05%和60.06%,达显著水平;15号株系的花药愈伤率都有所下降。3.三个株系的花药对变温和高渗组合处理的效果表现不同。12号株系和78号株系的花药愈伤率与单独变温处理相比有所提高,但差异不显著;15号株系的花药进行组合处理的效果不如变温处理的效果,愈伤率不同程度的下降。4.变温和离心组合处理对三个株系花药诱导愈伤组织形成存在明显差异。12号株系的花药在试验组9(变温处理+2500r/15min)下,愈伤率达到15.33%,比变温对照高出187.62%,达显著水平;15号株系的花药在试验组2(变温处理+2500r/3min)下,愈伤率达到19.33%,与变温对照的差异不显著;78号株系的花药在试验组2(变温处理+1700r/3min)下,愈伤率达到18.67%,比变温对照高出460.67%,达显著水平。5.在变温处理的条件下,进行离心速率、离心时间和高渗处理因素正交实验,结果表明,对不同株系的花药,影响其愈伤率的主效因素是不同的。对12号株系的花药而言,各因素的影响显著性依次为离心时间>高渗处理>离心速度,优化的最佳组合为:3700r/min+10min+RM-IR。对15号株系的花药而言,各因素的影响显著性依次为高渗处理>离心时间>离心速率,优化的最佳组合为:1700r/min+3min+SWC。对于78号株系的花药,各因素的影响显著性依次为高渗处理>离心时间>离心速率,优化的最佳组合为:2500r/min+15min+RM-IR。6.在诱导出愈伤组织后进行分化培养再生出植株。12号材料的花药经过高渗处理(RMD)的再生植株数最多为7株。15号材料的花药在变温+离心(2500r/10min)组合处理后,再生植株数最多为27株。78号株系的花药在变温+离心(1700r/3min)组合处理后,再生植株数最多为10株。