【摘 要】
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第一部分 miR-155在LPS诱导足细胞焦亡中的表达目的:通过LPS诱导足细胞焦亡模型的建立,评估建模效果及检测miR-155在足细胞焦亡模型中的表达水平。方法:（1）体外培养小鼠足细胞系MPC5,对足细胞进行支原体检测;（2）使用不同质量浓度的LPS（0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）干预足细胞24小时后检测Caspase-1、IL-1β、IL-18 m
【基金项目】
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广西自然科学基金（2017GXNSFAA198288）:MiR-155通过整合素-骨架蛋白通路导致足细胞损伤的分子机制研究； 国家自然科学地区基金（81860131）:MiR-155通过抑制IL-18/IL-18BP诱导足细胞焦亡促进狼疮性肾炎的作用机制研究；
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第一部分 miR-155在LPS诱导足细胞焦亡中的表达目的:通过LPS诱导足细胞焦亡模型的建立,评估建模效果及检测miR-155在足细胞焦亡模型中的表达水平。方法:（1）体外培养小鼠足细胞系MPC5,对足细胞进行支原体检测;（2）使用不同质量浓度的LPS（0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）干预足细胞24小时后检测Caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA和蛋白的表达水平;（3）用10μg/ml LPS作用于足细胞不同时间（0小时、12小时、24小时、36小时、48小时）后检测Caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA和蛋白的表达水平;（4）检测miR-155在LPS诱导足细胞焦亡中的表达;（5）使用慢病毒转染miR-155过表达和miR-155低表达并筛选稳定株。结果:（1）用于实验的小鼠足细胞系MPC5未被支原体污染。（2）使用不同质量浓度的LPS（0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）干预足细胞24小时后Caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA和蛋白的表达上调,质量浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的LPS可使miR-155的相对表达量显著上调;（3）用10μg/ml LPS作用于足细胞不同时间（0小时、12小时、24小时、36小时、48小时）后检测Caspase-1、IL-1β、IL-18 m RNA和蛋白的表达水平有不同程度的上调,miR-155的相对表达量在12、24小时高于正常对照组;（4）成功筛选出稳定的miR-155过表达和miR-155低表达细胞株。结论:LPS可以诱导足细胞焦亡,在足细胞焦亡模型中miR-155的表达水平上调。第二部分miR-155通过靶向NLRP1炎性体表达调控LPS诱导足细胞焦亡的机制研究目的:探索miR-155是否通过NLRP1炎性体调控LPS诱导的足细胞焦亡。方法:（1）使用生物信息学网站筛选miR-155的靶基因并通过荧光素酶报告基因实验和Western Blot验证;（2）通过LPS诱导足细胞、miR-155过表达稳定足细胞株和miR-155低表达稳定足细胞株的焦亡,在转录水平和蛋白水平检测NLRP1、Caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-18BP的表达;（3）免疫荧光观察LPS处理后各组足细胞NLRP1、Caspase-1、IL-18的表达情况。结果:（1）miR-155与NLRP1基因的3’UTR存在可相互作用的结合位点,荧光素酶报告基因实验证实miR-155可与NLRP1结合,Western Blot结果显示过表达miR-155可以抑制NLRP1蛋白的表达;（2）与LPS组相比,过表达miR-155可以抑制NLRP1、Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达水平,敲低miR-155的表达可以上调NLRP1、Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达水平。（3）免疫荧光结果显示,LPS处理后LPS+miR-155低表达组足细胞焦亡中NLRP1、Caspase-1、IL-18的标记荧光强度明显增强。结论:miR-155可靶向结合NLRP1的3’UTR并抑制NLRP1炎性体的表达,减少Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达,miR-155可能通过靶向NLRP1炎性体参与LPS诱导的足细胞焦亡的调控过程。
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