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目的：以来源于我国常用的猪布鲁菌弱毒疫苗S2株的WboA基因缺陷株(简称WboA-S2株)为实验菌株，并以S2株作为对照，体外观察WboA-S2株和S2株感染后的巨噬细胞（macrophage, MΦ）和树突状细胞（dentritic cell, DC）形态学变化、吞噬率、细胞凋亡、细胞因子产生及对T细胞的激活作用，探讨WboA基因编码产物在诱导机体抗感染免疫中的作用，为以WboA基因作为靶基因的新型布鲁菌疫苗的研制提供实验依据。方法：1．WboA基因编码产物在布鲁菌感染MΦ、BMDC中的作用制备小鼠腹腔MΦ和骨髓源性树突状细胞(BMDC)。用猪布鲁菌WboA-S2菌株以MOI100：1，分别感染小鼠腹腔MΦ和BMDC，并以S2株作为对照，观察感染后的MΦ、BMDC的形态学变化(1h、12h、24h)、吞噬率、载菌量(1h、6h、12h、24h)、凋亡率及分泌的细胞因子(24h、48h、72h)的变化。2．WboA-S2菌株刺激的BMDC和MΦ提呈抗原作用将感染WboA-S2菌株的BMDC和MΦ分别与T细胞共培养，并以S2菌株作为对照，观察共培养后不同时间点(24h、48h、72h)细胞上清中IFN-γ和IL-4水平的变化，以明确WboA基因编码产物在BMDC和MΦ提呈抗原、激活T细胞中的作用。结果：1. WboA-S2菌株和S2菌株感染MΦ和BMDC后的形态学变化瑞氏-吉姆萨染色光学显微镜下观察：感染后1h，MΦ内空泡增多增大，胞质内可见大量布鲁菌，WboA-S2感染的MΦ细胞膜较S2株组完整；感染后12h，WboA-S2和S2感染的MΦ胞质内仍见大量细菌，胞膜仍完整；感染后24h，S2感染MΦ胞膜消失，胞质脱落，核固缩，而相对WboA-S2感染后细胞膜较完整；而感染后BMDC的形态在观察的时间内没有明显改变，在感染后1h细胞体积略增大，胞质内仅有少量细菌，细胞较完整，至感染后24h仅少量细胞膜破损。2. WboA-S2菌株和S2菌株感染MΦ和BMDC吞噬率S2株感染后1h，MΦ的吞噬率为（43.6±4.8）%，显著高于BMDC的吞噬率（13.08±2.36）%（P<0.05）；WboA-S2菌株感染MΦ和BMDC后1h的吞噬率均高于S2感染的细胞（P<0.05），提示WboA-S2菌株更易被BMDC和MΦ吞噬。3. WboA-S2菌株和S2菌株感染MΦ和BMDC不同时间点载菌量的变化WboA-S2菌株感染1h，MΦ和BMDC的载菌量均高于S2感染组，随着相互作用时间的延长，各组细胞的载菌量均有所下降，至感染后24h WboA-S2菌株感染细胞的载菌量则明显低于S2感染组（P <0.01），这表明：WboA-S2菌株更容易被MΦ和BMDC杀死和清除。4. WboA-S2菌株感染对MΦ和BMDC分泌IL-12和TNF-α的影响MΦ组：与正常对照组比较，WboA-S2和S2菌株感染MΦ后各时间点培养上清中TNF-α和IL-12均明显高于正常对照组（P<0.01），说明布鲁菌WboA-S2、S2菌株可激活MΦ；WboA-S2菌株感染的MΦ分泌的TNF-α和IL-12明显高于S2感染组（P<0.01），表明WboA-S2菌株对MΦ的激活作用更强。BMDC组：与正常对照组比较，WboA-S2、S2株感染BMDC后各时间点培养上清中TNF-α和IL-12均明显高于正常对照组（P<0.01），且WboA-S2菌株感染组的TNF-α和IL-12明显高于S2感染组（P<0.05），说明布鲁菌WboA-S2株和S2株同样均可激活BMDC；而且BMDC对WboA-S2菌株刺激作用较布鲁菌S2株的刺激作用更强。5. WboA-S2菌株和S2菌株感染MΦ和BMDC凋亡率的检测WboA-S2和S2感染对照：结果表明WboA-S2在感染后24h MΦ的凋亡率明显高于S2感染组和正常对照组的凋亡率（P<0.05），而WboA-S2株和S2株感染后BMDC的凋亡与正常对照组之间没有统计学意义。这提示BMDC是S2株布鲁菌的强大捕获细胞。6. WboA-S2和S2菌株感染后MΦ与T细胞共培养上清中IFN-γ分泌与正常对照组相比，S2、WboA-S2菌株感染MΦ后能刺激初始T细胞分泌IFN-γ高于正常对照组（p<0.05），而WboA-S2菌株感染组的IFN-γ高于S2菌感染组（P<0.01），说明S2、WboA-S2菌株均可使MΦ呈递抗原刺激Th0向Th1分化，产生细胞免疫应答，而且WboA-S2菌株诱导MΦ提呈抗原、激活T细胞的作用比S2菌明显增强。实验结果首次证明了MΦ可提呈Brucella抗原并激活初始T细胞，并且以WboA-S2株为抗原负载的MΦ启动初始T细胞应答的能力更强。7. WboA-S2菌株和S2感染后BMDC与T细胞共培养上清中IFN-γ分泌与正常对照组比较，S2、WboA-S2菌株感染BMDC后能刺激T细胞分泌IFN-γ高于正常对照组（P<0.01），且WboA-S2菌株刺激T细胞分泌的IFN-γ远远高于S2菌感染组（P<0.01），说明S2、WboA-S2菌株同样均可使提呈抗原刺激Th0向Th1分化，产生细胞免疫应答，而且BMDC对WboA-S2菌株的加工提呈作用明显高于S2菌株。8. WboA-S2菌株和S2感染后MΦ和BMDC与T细胞共培养上清中IL-4分泌实验结果显示S2和WboA-S2菌株感染的MΦ和BMDC及正常组MΦ和BMDC与T细胞共培养上清中均未检测到IL-4分泌，表明S2、WboA-S2菌株感染MΦ和BMDC后没有刺激Th0向Th2分化，即不产生体液免疫应答。结论：1. WboA-S2菌株较S2菌株更易被MΦ和BMDC吞噬和清除，且WboA-S2菌株诱导MΦ和BMDC凋亡的能力较S2菌株强；2. WboA-S2菌株较S2菌株更易易激活MΦ和BMDC，且WboA-S2菌株诱导MΦ和BMDC提呈抗原、激活初始T细胞的能力强于S2菌株，WboA-S2菌株作为疫苗能刺激机体产生更强的抗布鲁菌免疫应答。