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禽网状内皮组织增生病（RE）是由禽网状内皮组织增生病病毒（REV）感染引起的以免疫抑制为主的禽类肿瘤性疾病,普遍存在于国内外养殖业,该病的大规模流行给家禽养殖业造成较大损失。由于目前对该病的研究较为局限,尤其对其肿瘤发生机制的研究不够全面,为了有效降低RE对养殖业的危害,迫切需要了解其发病的详细机制。S期激酶相关蛋白2（Skp2）作为泛素连接酶复合物（SCF）的识别底物,与细胞的异常增殖密切相关,在肿瘤研究中引起广泛关注。作为当前医学界、生物学界,尤其是动物医学界研究热点之一,纵观国内外对Skp2基因已有的相关研究报道,其主要在哺乳动物中,特别是在人类某些疾病中的研究较为深入,而关于禽类Skp2基因与REV造成的细胞周期异常的关系,迄今未见报道。本研究在成功构建了短发卡RNA（sh RNA）介导Skp2沉默质粒载体,并转染至REV感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEFs）中的基础上,进一步在转录和蛋白水平上分别应用RT-PCR和Western Blot技术较系统的研究了REV感染SPF CEFs后,其Skp2,p27,Cyclin D1 mRNA表达和蛋白含量的变化;应用流式细胞术结合PI单染方法对REV感染SPF CEFs细胞周期的变化进行了检测;使用CCK-8 Kit检测试剂盒对REV感染SPF CEFs的细胞增殖活力做了较全面系统的研究。这项研究有助于进一步了解由REV造成的细胞周期异常机制,为RE的综合防治（制）寻找新的分子靶点,主要研究结果如下:（1）本研究成功建立了鸡Skp2基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法最优反应体系20.0μL:包含Real-time PCR Master mix（2×）10.0μL,上、下游引物（10μmol/L）各1.0μL,c DNA 2.0μL,dd H2O 6.0μL;最佳反应条件为95℃预变性10 s,95℃变性5 s,60℃退火/延伸34s,30个循环。（2）SPF CEFs感染REV后6h、12h、24h、48h、72h、96h和120h,其Skp2 mRNA表达量均不同程度高于病毒未感染的对照组,其中24h、48h和72h极显著（P<0.001）增高。（3）与未感染REV的对照相比,REV感染SPF CEFs后12h、24h和48h,CEFs细胞增殖活力均显著（P<0.05或P<0.01）增加。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs细胞增殖活力显著（P<0.01）降低;V-sh RNA-NC组CEFs增殖活力未见统计学差异（P>0.05）。（4）在成功构建的shRNA-908、sh RNA-358、sh RNA-225和sh RNA-141四个Skp2表达抑制质粒中,sh RNA-358和sh RNA-141对Skp2的抑制作用在转染后24h、48h及72h极显著（P<0.001）升高。（5）与空白对照组相比,REV感染SPF CEFs,其p27 mRNA表达量极显著（P<0.001）降低;Cyclin D1 mRNA表达量极显著（P<0.001）升高。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs,其Skp2和Cyclin D1 mRNA表达量极显著（P<0.001或P<0.01）下降;而p27 mRNA表达量无显著（P>0.05）变化。转染质粒sh RNA-NC作用于CEFs后,上述被检指标的mRNA表达量均未见统计学差异（P>0.05）。（6）与空白对照组相比,REV感染SPF CEFs后,其Skp2和Cyclin D1蛋白表达量均显著（P<0.01）增加,p27蛋白表达量极显著（P<0.001）减少。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs,其Skp2和Cyclin D1蛋白表达量显著（P<0.01或P<0.001）降低;p27蛋白表达量显著（P<0.05）升高。转染质粒sh RNA-NC作用于CEFs后,上述被检指标的蛋白表达量均未见统计学差异（P>0.05）。（7）CEFs感染REV后,其G0/G1期细胞数较对照组极显著（P<0.01）减少,G2/M期细胞数显著（P<0.01）增多,S期细胞数未见统计学差异（P>0.05）;与REV感染组相比,V-sh RNA-358组和V-sh RNA-141组G0/G1期细胞数较对照组极显著（P<0.01）增多,G2/M期细胞数显著（P<0.01）减少,S期细胞数未见统计学差异（P>0.05）;而V-sh RNA-NC组各期细胞数均无显著变化（P>0.05）。上述研究结果为进一步阐明REV感染对CEF细胞增殖和周期的影响以及Skp2在其中所扮演的角色提供了重要的科学实验依据。也为进一步在分子调节水平上探讨REV的免疫致病机制提供了新思路。