结肠癌是一种较为常见的消化道肿瘤,其传统的治疗原则以手术为主的综合治疗,同时联合化疗、放疗等降低手术后的复发率,提高患者的生存率。对于复发性或转移性结肠癌,其中综合治疗在化疗中占主要地位。近年来研究发现环氧化酶-2(COX-2)可以通过其多种途径参与肿瘤的发生及发展,可以抑制肿瘤细胞的凋亡,促进新生血管的生成。本实验通过奥沙利铂(L-OHP), COX-2抑制剂NS-398及奥沙利铂联合NS-398对结肠癌HCT-8细胞体外培养,研究其以上物质对细胞增殖和凋亡的影响。为初步观察与奥沙利铂联合作用的NS-398对HCT-8细胞在倒置显微镜下观察到奥沙利铂和奥沙利铂联合NS-398对结肠癌HCT-8细胞的生长影响。结果出现奥沙利铂和NS-398浓度的添加使其增高的细胞逐渐减少,变圆,贴壁细胞出现漂浮,折光性差。接着运用CCK-8实验检测不同浓度奥沙利铂单用(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00mmg·L-l),奥沙利铂联合NS-398(20.00、80.00μmol·L-1)对HCT-8细胞作用24h的细胞抑制率；其运用Annexin V-FITC和PI双染流式细胞术检测奥沙利铂(10.00mg-L1)、NS-398(50.00mg·L-1)单用及奥沙利铂联合NS-398对HCT-8细胞作用24h的早期凋亡情况；并用流式细胞术检测奥沙利铂,NS-398单用及奥沙利铂联合NS-398对HCT-8细胞48h的细胞周期变化。为进一步研究观察奥沙利铂和NS-398对细胞有无协同效应,运用琼脂糖凝胶电泳检测奥沙利铂单用(2.50、5.00、10.00、20.OOmg·L-1)及联合NS-398(10.00、100.00μmol·L-1)对HCT-8细胞作用48h的DNA Ladder情况；利用荧光显微镜观察细胞凋亡作用48h时凋亡情况。Caspase-3活性检测奥沙利铂和NS-398单用及联合作用48h时结肠癌HCT-8细胞中Caspase-3活性增高的变化。实验发现：奥沙利铂,NS-398对HCT-8细胞呈剂量性的依赖抑制作用(P<0.05)。奥沙利铂联合NS-398作用组的HCT-8细胞增殖抑制率明显高于同一浓度的奥沙利铂单用组,并且随着NS-398添加剂量而增加。Annexin V-FITC检测细胞早期凋亡显示奥沙利铂呈剂量依赖性的诱导细胞凋亡和细胞死亡,联合作用组对HCT-8细胞明显强于单用奥沙利铂对HCT-8细胞的作用,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞周期显示,奥沙利铂,NS-398及联合作用组HCT-8细胞48h后对照组相比,细胞周期能被阻滞,奥沙利铂将HCT-8细胞的S期阻滞,NS-398将HCT-8细胞的Go/G1期阻滞,奥沙利铂和NS-398可诱导结肠癌HCT-8细胞凋亡,对NS-398添加的奥沙利铂细胞凋亡明显增加。琼脂糖凝胶电泳显示奥沙利铂,NS-398联合作用结肠癌HCT-8细胞48h能检测到DNA Ladder, NS-398不同剂量添加奥沙利铂,DNA梯状条带亮于奥沙利铂组。Hoechst33258荧光显微镜观察细胞凋亡作用48h时,正常细胞核呈弥散均匀的蓝色,而凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状,颜色有些发白,联合用药后可见凋亡细胞明显。Caspase-3活性检测奥沙利铂和NS-398单独作用对结肠癌HCT-8细胞中Caspase-3活性增高。两药联合作用时对结肠癌HCT-8细胞中Caspase-3活性起加强作用,差异具有统计学意义(P<0.01),二者具有协同作用。COX-2选择性抑制剂NS-398,奥沙利铂对结肠癌HCT-8细胞具有生长抑制作用,且呈浓度依赖性关系。两药联合时HCT-8细胞增强了同浓度的奥沙利铂能抑制生长和诱导凋亡作用。两药联合作用具有明显协同作用。奥沙利铂联合COX-2抑制剂NS-398抗肿瘤机制与细胞周期及Caspase-3诱导凋亡途径有关。可见,COX-2选择性抑制剂联合L-OHP等化疗药广泛的应用前景,为临床化疗药物的剂量提供希望。