在肿瘤免疫治疗中,抗体靶向治疗因其特异性强、靶向性高和治疗过程相对较短而备受重视。抗体靶向治疗包括:抗肿瘤单克隆抗体直接体内应用;抗肿瘤单克隆抗体与抗肿瘤药物、生物毒素或同位素偶联,通过抗肿瘤单抗将效应分子引导至肿瘤局部,杀伤肿瘤等。目前,在国外已有8种治疗型抗体药物被批准正式进入临床,用于肿瘤治疗。同时,将抗体偶联上放射性核素用于肿瘤诊断也已经在临床得到越来越广泛的应用。本课题的目的即通过对肿瘤相关基因T351特异性抗体的治疗肿瘤作用的研究,为治疗型抗体的应用奠定基础在研制肿瘤治疗和诊断型抗体时,有效的肿瘤抗原和相应的高特异性抗体是两个关键因素。在前期工作中利用差异显示发现了一个肺癌高表达新基因t351,为了将其开发成具有肿瘤诊断或（和）肿瘤治疗价值的单克隆抗体,本文做了以下研究:一、利用生物信息学方法,对t351基因编码蛋白的结构,功能和细胞定位进行了分析和预测。分析结果表明,该基因编码蛋白是与物质运输有关的膜定位蛋白,具有6个跨膜区。利用RT-PCR及实时定量PCR方法,在mRNA水平对t351基因在多发肿瘤及瘤旁组织和多种肿瘤细胞系中的表达情况进行了研究。结果显示,该基因在肿瘤组织和肿瘤细胞系中呈广泛高表达,其肿瘤组织中的表达水平是相应癌旁组织的1.3～9.2倍。二、根据对糖基化和磷酸化位点的预测结果,我们选取了编码胞外区的一段基因序列进行表达。构建了所选t351基因片段的原核表达质粒pET25b（+）-351philic。经过转化宿主菌大肠杆菌BL-21,IPTG诱导表达,纯化等一系列工作,获得了该基因的编码重组蛋白。经SDS-PAGE Western等方法鉴定,得到的蛋白纯度较高,可以用来作为抗原制备相应的单克隆抗体。三、用制备的蛋白免疫BALB/C小鼠,通过经典杂交瘤技术,制备出了针对t351蛋白亲水片断的单克隆抗体。经过对得到单抗的一系列鉴定,筛选出三株杂交瘤细胞,C1-1,C1-8和C6-5.这三株杂交瘤细胞抗体效价高,可结合原核表达的t351蛋白亲水片段以及高表达t351基因的细胞膜蛋白。将杂交瘤小鼠腹腔注射获得腹水,经纯化得到了高纯度的单克隆抗体。四、以得到的单抗为工具,经免疫组化,流式细胞分析,从蛋白水平分析了t351基因在肿瘤组织和肿瘤细胞系细胞的表达,以及其在组织和细胞中的定位情况。结果显示,该基因编码蛋白在肿瘤组织和细胞都有较高的表达。免疫组化结果还观察到该蛋白同时表达在胞浆和胞膜。五、以BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞为效应细胞,肿瘤细胞HepG2,HT29和GLC-82为靶细胞,t351蛋白单抗C1-1为中介,行ADCC实验;研究该抗体作为治疗型抗体的可行性。结果表明,C1-1介导了较高的杀伤效应,可进一步用于肿瘤免疫治疗的研究。六、用放射性核素^99mTc标记单抗C1-1,做体外结合肿瘤细胞实验和荷瘤小鼠体内显影。二者结果均不理想。其可能原因是标记抗体条件不适合,使得标记后抗体对细胞的结合下降。综上所述,t351基因是一个在肿瘤中广泛表达和高表达的基因,其编码蛋白为膜蛋白,可以做为肿瘤免疫诊断和治疗的靶标。本研究制备的抗t351蛋白的单克隆抗体,具有较高特异性和亲和力,在肿瘤的免疫诊断和治疗中有较高的应用价值。