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本研究分为二部分:
第一部分、黔产SNT提取物的制备
目的:(1)研究黔产SNT的提取工艺,并对其提取工艺进行优化,确定黔产SNT的最佳提取工艺参数,制备其提取物,包括总提取物、水洗脱物、乙醇洗脱物等;(2)对SNT提取物,包括总提取物、水洗脱物、乙醇洗脱物进行定性分析。
方法:(1)采用溶剂回流加热法进行提取。在单因素试验的基础上,以提取次数、提取时间、料液比和浸泡时间等因素安排正交试验,以质量提取率为指标,优选黔产SNT提取的最佳工艺;(2)采用理化分析方法对提取物,包括总提取物、水洗脱物、乙醇洗脱物等进行初步定性分析。
结果:(1)提取的最佳工艺为:提取时间为2小时,提取次数为3次,料液比为1:30,浸泡时间为2小时;(2)经过初步定性反应确认总提取物含有氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱、甾体或三萜类、黄酮、皂苷、多糖、还原糖及糖苷、香豆素及萜类内酯化合物、酚类和鞣质成分;水洗脱物含有氨基酸、多肽、蛋白质、皂苷、多糖、还原糖及糖苷、香豆素及萜类内酯化合物;乙醇洗脱物含有氨基酸、多肽、蛋白质、生物碱、甾体或三萜类、黄酮、多糖、还原糖及糖苷、酚类和鞣质成分。
结论:溶剂回流加热法提取黔产SNT的正交试验表明:影响提取的主要因素为提取次数、料液比、其次为提取时间、浸泡时间。最佳组合为A3B2C3D3。通过验证试验证明此组合质量提取率高,说明优选出来的参数较为可行、稳定。
第二部分、黔产植物SNT提取物对急性肝损伤小鼠的保护作用
目的:探讨SNT提取物(总提取物、水洗物、醇洗物)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用并初探其作用机制。
方法:昆明种小鼠适应性喂养一周后,根据实验需要随机分成正常对照组、模型组、阳性对照药联苯双酯(150mg/kg)组、总提物高剂量(1g/kg)组、总提物低剂量(0.5g/kg)组、水洗物高剂量(1g/kg)组、水洗物低剂量(0.5g/kg)组、醇洗物高剂量((1g/kg-1)组、醇洗物低剂量(0.5g/kg-1)组。小鼠灌胃(ig)给药,连续7d,每天一次,正常组和模型组灌胃(ig)等量生理盐水。各组小鼠最后一次给药30 min后,模型组和给药组小鼠均腹腔注射(ip)0.15% CCl4菜油溶液(10 ml/kg),正常对照组腹腔注射(ip)等量生理盐水。20h后,小鼠眼球取血,拉颈处死,迅速解剖分离肝脏。制备血清检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;制备小鼠肝组织匀浆,测定肝组织匀浆中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;计算肝脏的湿重指数;HE染色法观察肝脏组织的病理变化。
结果:与正常对照组相比,模型组小鼠血清ALT, AST水平显著升高(p<0.01),肝组织SOD活性明显下降(P<0.01), MDA含量显著升高(P<0.01),血清TNF-α含量升高,肝脏湿重指数显著升高(P<0.01)。与模型组相比,醇洗物高、低剂量组、总提物高剂量组小鼠血清ALT, AST明显降低(P<0.05,P<0.01);肝组织MDA降低((P<0.01), SOD活性明显提高((P<0.01); TNF-α含量明显降低(P<0.01),其中以醇洗物高剂量组较为显著,肝脏湿重指数明显降低(P<0.05)。HE染色显示:模型组小鼠肝细胞出现弥漫性气球样变,可见散在小灶性坏死伴炎细胞浸润,醇洗物、总提物各剂量组肝脏病理变化不同程度的轻于模型组,其中以醇洗物高剂量组肝脏病理变化改善程度较为显著。
结论:SNT提取物(总提物、醇洗物)可减轻CCl4诱导的急性肝损伤,其机制与抗氧化、抑制TNF-α的产生有关。