血吸虫感染小鼠经吡喹酮治疗后疗效考核检测方法的建立与初步评价

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目的构建BALB/c小鼠日本血吸虫感染的吡喹酮治疗动物模型,建立并初步评估吡喹酮治疗血吸虫病疗效的考核方法。为进一步临床研究吡喹酮治疗的疗效考核奠定基础。方法经预实验:日本血吸虫感染小鼠模型建立实验(BALB/c小鼠150只)和日本血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗模型建立实验(BALB/c小鼠90只),确定日本血吸虫感染小鼠吡喹酮治疗疗效考核方法的建立与评价实验方案。在疗效考核方法的建立与评价的实验中,102只6~8周龄BALB/c小鼠随机分成3组,分别为感染组(37只)、治疗组(37只)和对照组(28只)。感染组和治疗组小鼠经腹部感染血吸虫尾蚴(约25条/鼠)。感染6周时,治疗组第一次吡喹酮治疗,150mg·kg-1给药,连续3d;2周后进行第二次治疗,剂量300mg·kg-1,连续3d。实验过程中对小鼠生存情况、肝脾指数和体重进行监测,对小鼠血清中血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble EggAntigen,SEA)特异性抗体(IgG和IgM)水平的变化通过酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)实验和免疫印迹(Western blot,WB)实验进行检测,采用ELISA方法检测小鼠血清中SEA特异性细胞因子伽马干扰素(interferon-γ, IFN-γ)、白细胞介素4(interleukin-4, IL-4),同时通过酶联免疫斑点(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)实验检测小鼠脾淋巴细胞中SEA特异性分泌IFN-γ、IL-4的细胞数量。同时对血吸虫病人治疗前后采用上述方法进行监测。结果1感染血吸虫6~9周的BALB/c小鼠处于急性感染时期;之后的4周为急慢性感染之间的过渡时期,随后病程进入慢性感染期。2小鼠的肝脾指数及体重在血吸虫感染小鼠治疗后明显好转,血清中SEA特异性抗体(IgG和IgM)、细胞因子(IFN-γ和IL-4)在不同时间均会出现明显下降,血清中SEA的180kD特异性IgG在治疗后2周开始降低,43kD、48kD、50kD特异性IgG在治疗后6周开始降低。3血吸虫感染小鼠治疗后脾细胞中特异性分泌IFN-γ、IL-4的淋巴细胞数量呈现明显的下降趋势。结论1吡喹酮治疗后血吸虫感染小鼠的肝脾形态及体重变化、血清中SEA特异性抗体(IgG和IgM)、细胞因子(IFN-γ和IL-4)的联合检测对于吡喹酮治疗血吸虫感染小鼠疗效的考核具有重要价值。2日本血吸虫SEA的43kD、48kD、50kD、180kD抗原具有较高的疗效考核价值。3小鼠血吸虫模型的疗效考核方法对人体血吸虫病吡喹酮的治疗效果考核具有一定的指导意义。
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