黄鳝中鲑鱼促性腺激素释放激素(sGnRH)cDNA的克隆及表达分析

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本研究通过3’RACE和5’RACE的方法,从黄鳝的下丘脑总RNA中扩增出sGnRH的全长cDNA,全长为643bp,编码一个90个氨基酸的前体。sGnRH前体包括:23个氨基酸的信号肽、10个氨基酸的sGnRH、具有结合酰胺化酶和前体处理位点的Gly-Lys-Arg序列和54个氨基酸的相关肽(GAP)。进化树分析表明,黄鳝sGnRH与其它鱼类的sGnRH处于同一组,与银汉鱼sGnRH处于同一分支,表明黄鳝与银汉鱼的进化关系较近。Northern杂交在黄鳝前部脑(嗅球和前脑)检测到很强的单一带,约为500bp,在中部脑(下丘脑和中脑)和后部脑(后脑和延脑)未检测到,表明黄鳝sGnRH在前部脑的表达量很高。RT-PCR结合Southern杂交的结果表明:黄鳝sGnRHmRNA在各脑区,包括嗅球、前脑、中脑、后脑、下丘脑、延脑,和垂体都有表达,其中,在嗅球、前脑、中脑和下丘脑表达量较高;在外周组织中,除肾脏外,均检测到sGnRH的表达,其中精巢表达量最高。RT-PCR分析表明在性逆转过程中,黄鳝五个脑区的sGnRHmRNA表达分布存在差异。雌性鱼在前脑的sGnRH表达量较高,其他脑区表达量较低;间性鱼在后脑的sGnRH表达量较高,其它脑区表达较低;雄性鱼各脑区sGnRH表达量普遍较低,嗅球和延脑比其它脑区表达量高。这些结果表明sGnRH可能参与了黄鳝性逆转过程的调节。   本研究采用半定量RT-PCR检测了sGnRH对黄鳝性腺组织中GtHⅠβ和GtHⅡβ表达的影响。不同浓度sGnRH(0、0.1、1、10、100、1000nM)处理3h和6h,性腺中GtHⅠβ和GtHⅡβ的表达没有明显变化。因此有关性腺中sGnRH功能,以及性腺中GtH表达的调节有待进一步探讨。
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