目的:了解大连地区临床分离革兰阴性菌中介导高水平氨基糖苷类抗生素耐药的16S rRNA甲基化酶基因armA、rmtB的流行情况并研究其耐药机制。方法:收集临床分离的耐阿米卡星的无重复革兰阴性杆菌134株(包括56株鲍曼不动杆菌、29株大肠埃希菌、35株肺炎克雷伯菌、4株铜绿假单胞菌、3株产气肠杆菌、2株阴沟肠杆菌和5株黏质沙雷氏菌)。PCR方法筛选2种甲基化酶基因armA及rmtB;PCR产物进行测序。对阳性菌进行质粒提取,接合试验及转化试验确定armA及rmtB基因定位。琼脂稀释法测定阳性菌株、结合子和转化产物DH5a(pMDarmA)对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3种氨基糖苷类抗生素的MIC值。结果:134株耐药菌株中,21(37.5%)株鲍曼不动杆菌检出armA基因,5(17.2%)株大肠埃希菌和5(14.3%)株肺炎克雷伯菌检出rmtB基因。质粒抽提试验及接合试验中,21株armA阳性鲍曼不动杆菌均未获成功,有7株rmtB阳性菌获得成功且均为产超广谱β-内酰胺酶菌。接合子及转化产物DH5a(pMDarmA)均获得高水平耐氨基糖苷类的特性(MIC≥1024mg/L)。结论:在大连地区检测到了16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株。armA基因存在于鲍曼不动杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的质粒上。armA和rmtB可以导致细菌对氨基糖苷类抗生素的高水平耐药。