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目的：1.体外观察过氧亚硝基离子(ONOO-)依赖途径对脑组织硝基化的作用以及羟基红花黄色素A(HSYA)对该种途径的影响,初步探讨HSYA对损伤脑组织的保护作用机制；2(ONOO-)依赖途径对神经元的硝基化作用及羟基红花黄色素A (HSYA)对该种途径的影响,初步探讨ONOO-对神经元PPARy的硝基化修饰及硝基化修饰PPARy活性的研究,并进一步研究羟基红花黄色素A对硝基化的PPARy的活性的影响机制3.体内以大鼠MCAO/R模型为例,观察脑缺血再灌注损伤诱导的脑组织蛋白质硝基化、硝基化的PPARy,及羟基红花黄色素A对硝基化的PPARy活性的影响机制。方法：1.体外建立脑组织硝基化(即ONOO-途径),以正常大鼠脑组织为底物,分为空白对照组、对照组、HSYA干预组(终浓度为0.01、0.1、1mmol/L),蛋白质硝基化以Western blot检测3-硝基酪氨酸(3-NT)的表达情况；2.体外原代培养大脑皮层神经元作为实验材料,分为空白对照组、ONOO"组、ONOO-和GLU联合处理组,HSYA干预组。Western blot法检测不同组别细胞内PPARγ、3-NT,Bcl-2的蛋白含量,免疫共沉检验硝基化的PPARy免疫荧光染色法对不同组别细胞内PPARy细胞定位,3-NT阳性细胞数,NF-Kb的阳性细胞数及细胞内定位。3.将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、HSYA治疗组,使用线栓法制备大鼠MCAO/R模型,缺血60min,再灌注24h。治疗组于缺血前30min尾静脉注射HSYA (10mg/kg)。采用神经功能缺损评分、TTC染色初步评估HSYA对脑缺血再灌注大鼠的损伤程度、梗死体积的影响；Western blot法检测不同组别脑组织的3-硝基酪氨酸,Bcl-2的蛋白含量,免疫共沉检验硝基化的PPARy,免疫荧光染色法对不同组别细胞内PPARy细胞定位,3-NT阳性细胞数,Bcl-2的阳性细胞数及细胞内定位。结果：1.体外实验：(1)与空白对照组相比,正常大鼠脑组织在反应体系中孵育30分钟均可被硝基化,3-NT含量分别增加了94.90%。与对照组相比,各HSYA干预组3-NT表达呈剂量依赖性降低,在ONOO反应体系依次降低了16.58%、30.25%、79.22%,差异有统计学意义(F=166.412,P<0.05。(2)ONOO-高度诱导神经元细胞3-NT表达增加；与ONOO组相比,HSYA处理使3-NT表达下降了31.20%,差异有统计学意义。ONOO没有影响PPARy的蛋白含量表达。通过免疫共沉证明了神经元细胞的PPARγ可以发生硝基化,并且硝基化PPARγ的入核作用减弱,HYSA不影响PPARγ的表达含量,但是通过我们的实验发现由于它良好的抗增加作用,可以增加PPARγ的生物功能,抑制NF-κB的生成及凋亡。(3)体内实验(大鼠MCAO/R模型)：(1)与假手术组相比,模型组大鼠mNSS评分增加,平均梗死体积为34.45%；与模型组相比,HSYA治疗组大鼠mNSS评分降低(t=2.746,P<0.05),同时梗死体积平均缩小41.22%(t=4.673,P<0.01)。(2)免疫荧光和Western blot检测均显示,假手术组大鼠脑组织有少量3-NT表达；模型组其表达明显增加；HSYA治疗组其表达明显下降,差异有统计学意义(F=94.120,P<0.05；F=32.072,P<0.05)。(3)通过免疫共沉观察到MCAO/R大鼠的PPARγ硝基化。(4)硝基化的PPARγ主要是位于胞浆,硝基化的PPARγ修饰抑制PPARγ核内移,同时Bcl-2阳性细胞大量减少,Bcl-2的蛋白含量也明显减少结论：1、ONOO-途径可以在体外诱导脑组织发生蛋白质硝基化；HSYA (0.01、0.1、1mM)可剂量依赖性地抑制ONOO-途径诱导的脑组织硝基化,1mM HSYA的抑制作用最明显。2、ONOO-途径使神经元蛋白质发生硝基化,产生3-NT,而红花具有良好的抗硝基化作用。3、神经元细胞的PPARγ可以发生硝基化,并且硝基化修饰抑制了PPARγ的入核,促进了NF-κB的生成及Bcl-2含量的减低。HSYA抑制神经元细胞的硝基化,同时抑制PPARy硝基化的修饰,增加其入核的生物活性,抑制NF-κB的生成及增加Bcl-2含量。4、体内研究显示,脑缺血再灌注损伤可诱导脑组织发生蛋白质硝基化,HSYA对脑缺血再灌注蛋白质硝基化损伤具有保护作用。5、MCAO/R大鼠的脑组织中含有PPARγ肖基化形式,并且这种硝基化的PPARγ主要位于胞浆里,同时观察到硝基化修饰PPARy核内迁移受抑制,Bcl-2的蛋白表达含量降低,可能促进了凋亡。；HSYA抑制PPARy硝基化的修饰,增加其入核的生物活性,抑制NF-κB的生成及增加Bcl-2含量,可能抑制了细胞的凋亡。