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研究背景:多西紫杉醇是前列腺癌的一线化疗药物,单独用药疗效仍待提高。川陈皮素能抑制多种肿瘤细胞的增殖。DAB2IP是抑癌基因,在多数肿瘤中表达缺失,其高表达能抑制肿瘤细胞增殖、转移。EZH2在一些侵袭性强或已转移的肿瘤中高表达,指出EZH2表达越高,肿瘤的恶性程度越高,侵袭性越强。研究发现EZH2能下调DAB2IP的表达参与肿瘤的进展。前期实验已成功将DAB2IP基因转染进入PC3细胞,本课题拟将川陈皮素、多西紫杉醇进行研究,探讨对前列腺癌PC3、DAB2IP+/PC3细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响,和探讨DAB2IP和EZH2在前列腺疾病中表达的差异和临床意义,为前列腺癌的治疗提供新的思路和作用靶点。第一部分川陈皮素和多西紫杉醇对前列腺癌PC3和DAB2IP+/PC3细胞生长的影响目的探讨川陈皮素、多西紫杉醇对前列腺癌PC3和DAB2IP+/PC3细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法川陈皮素(浓度为6.25、12.5、25、50、62.5μmol/L)、多西紫杉醇(浓度为10-5、10-6、10-7mol/L)以及联合用药对空质粒组和转染组细胞分别作用24h、48h后,各浓度组4个负孔,并设不加药组作为空白对照,运用MTS法检测两组细胞的增殖活性。川陈皮素(浓度为62.5μmol/L)、多西紫杉醇(浓度为10-5、10-7mol/L)以及联合用药对两组细胞分别作用24h、48h后,并设不加药组作为空白对照,采用划痕试验检测细胞的迁移能力。川陈皮素(浓度为62.5μmol/L)、多西紫杉醇(浓度为10-5、10-7mol/L)以及联合用药对两组细胞分别作用24h、48h后,并设不加药组作为空白对照,使用流式细胞仪检测细胞的凋亡作用。结果MTS结果:川陈皮素作用24h、48h后,同一浓度川陈皮素作用两组细胞,转染组与空质粒组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度川陈皮素作用空质粒组细胞,无加药(空白)组、6.25μmol/L组分别与62.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度川陈皮素作用转染组细胞,空白组、6.25μmol/L组和12.5μmol/L组分别与62.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);6.25μmol/L组与50μmol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。多西紫杉醇作用24h、48h后,同一浓度多西紫杉醇作用两组细胞,转染组与空质粒组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。多西紫杉醇(10-5、10-6、10-7mol/L)组分别与空白组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),不同浓度多西紫杉醇间的差异无统计学意义(P>0.05)。川陈皮素(浓度为6.25、12.5、25、50、62.5μmol/L)分别与多西紫杉醇(浓度为10-5、10-6、10-7mol/L)联合作用24h、48h后,同一联合浓度作用两组细胞,转染组与空质粒组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(1)空质粒组细胞:同一浓度多西紫杉醇(10-5mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组与6.25μmol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度多西紫杉醇(10-6mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组与6.25μmol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);同一浓度多西紫杉醇(10-7mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组、50μmol/L组分别与6.25μmol/L组相比,62.5μmol/L组与12.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);同一浓度川陈皮素(62.5μmol/L)+不同浓度多西紫杉醇,10-5mol/L组与10-7mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);其余各组间无统计学意义。(2)转染组细胞:同一浓度多西紫杉醇(10-5mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组、50μmol/L组分别与6.25μmol/L组相比,62.5μmol/L组与12.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);同一浓度多西紫杉醇(10-6mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组、50μmol/L组分别与6.25μmol/L组相比,62.5μmol/L组、50μmol/L组分别与12.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);同一浓度多西紫杉醇(10-7mol/L)+不同浓度川陈皮素,62.5μmol/L组、50μmol/L组、25μmol/L组分别与6.25μmol/L组相比,62.5μmol/L组、50μmol/L组分别与12.5μmol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);同一浓度川陈皮素(62.5μmol/L)+不同浓度多西紫杉醇,10-5mol/L组与10-7mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);其余各组间无统计学意义。迁移结果:不同药物作用24h、48h后,同一药物浓度,转染组与空质粒组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。各组药物对两组细胞的迁移率与空白组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-5mol/L组与10-7mol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇(10-5mol/L、10-7mol/L)组与川陈皮素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合用药组与川陈皮素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-5mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-5mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-7mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-7mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。多西紫杉醇10-5mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-7mol/L+川陈皮素62.5μmol/L)组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。凋亡显示:不同药物作用24h、48h后,同一药物浓度,转染组与空质粒组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。各组药物对两组细胞的凋亡率与空白组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-5mol/L组与10-7mol/L组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇(10-5mol/L、10-7mol/L)组与川陈皮素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合用药组与川陈皮素组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-5mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-5mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05);多西紫杉醇10-7mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-7mol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。多西紫杉醇10-5mol/L+川陈皮素62.5μmol/L组与多西紫杉醇10-7mol/L+川陈皮素62.5μmol/L)组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.川陈皮素、多西紫杉醇能抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。2.联合用药的作用强于单独用药,且川陈皮素能降低多西紫杉醇的用药浓度,表明川陈皮素能增强化疗药物的作用。3.DAB2IP转染能抑制前列腺癌PC3细胞的增殖,DAB2IP转染能增强药物的作用。第二部分DAB2IP和EZH2在前列腺疾病中表达的研究目的探讨DAB2IP和EZH2在前列腺癌和前列腺良性增生中的表达和临床意义。方法随机挑选40例前列腺癌患者和10例前列腺良性增生患者,全部前列腺癌患者术前均未接受内分泌治疗、放疗和化疗。从病理科标本库中取出对应患者的组织蜡块,每个蜡块切两张,分别进行DAB2IP和EZH2的免疫组织化学方法检测。结果EZH2主要表达在细胞核,呈棕黄色。DAB2IP主要表达在细胞质,呈棕黄色或深棕色。EZH2在前列腺癌组织表达的阳性率为77.5%,在前列腺良性增生组织的表达阳性率为30%,差异有统计学意义(P<0.05)。DAB2IP在前列腺良性增生组织的表达阳性率为80%,在前列腺癌组织的表达阳性率为27.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。EZH2和DAB2IP在前列腺癌和前列腺良性增生组织间的表达差异存在负相关(P<0.05)。在前列腺癌中,EZH2的表达与Gleason评分间存在正相关(P<0.05)。结论1.EZH2在前列腺癌组织中高表达,在前列腺良性增生组织中低表达。2.在前列腺癌组织中,EZH2的表达与Gleason评分间存在正相关;EZH2的表达与DAB2IP的表达间存在负相关。