论文部分内容阅读
氟苯尼考是一种人工合成的高效广谱动物专用抗生素,常用于防治动物的各种细菌性疾病。但由于不规范使用和滥用,它在动物食品中会产生残留,并因此带来各种问题。为了保障食品安全问题,各国政府及监测机构均对氟苯尼考的使用和最高残留限量(MRL)都做了规定,因此,本研究旨在应用胶体金免疫层析原理,研制出氟苯尼考残留检测试纸条。1.氟苯尼考多克隆抗体的制备及其鉴定。本研究根据氟苯尼考的结构特性,采用戊二醛法设计出氟苯尼考的人工抗原(免疫原FFA-BSA和包被原FFA-OVA),并用免疫原免疫BALB/C雌性小鼠,获得可用于检测氟苯尼考的特异性多克隆抗体。结果显示：经过紫外扫描鉴定,成功合成了人工抗原合FFA-BSA和FFA-OVA,偶联比分别为12：1和11：1。制备的抗体效价达1：32000以上,抑制率为50%(IC50)时的氟苯尼考浓度为369ng/mL,与其他抗生素交叉反应小。本试验制备的氟苯尼考多克隆抗体具有较好亲和力和高特异性,有良好的应用价值。2.氟苯尼考残留快速检测胶体金试纸条的研制。采用柠檬酸三钠还原法制备25nm胶体金,用制备的胶体金标记氟苯尼考的特异性抗体,用喷膜机把适量的金标抗体喷涂在结合垫上,适宜浓度的包被原和羊抗鼠二抗分别作为检测带和质控带包被在硝酸纤维素膜上,包被后的硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成氟苯尼考残留快速检测胶体金试纸条。结果显示：研制的试纸条检测灵敏度为1μg/mL,与氯霉素、甲砜霉素和喹乙醇等抗生素无交叉反应,能在4℃干燥的条件下可至少存放6个月。试验证明制备的试纸条具有较高的灵敏度及特异性、操作便捷、稳定可靠,可作为氟苯尼考残留检测的一种快速简便方法。3.胶体金免疫层析技术和液相色谱-质谱(LC-MS)法检测肉食品中氟苯尼考的残留。对肉食品中氟苯尼考残留检测的胶体金免疫层析法和液相色谱-质谱法进行比较研究。胶体金免疫层析法对1.0μg/mL以上均能检出,液相色谱-质谱法平均回收率分别为86.5%、93.7%和90.9%,变异系数为2.1%～5.0%,最低检测限为100μg/kg。对80个样品用胶体金免疫层析法筛选皆为阴性,经液相色谱-质谱法验证皆为阴性,未发现假阳性和假阴性。结果表明：胶体金免疫层析法具有快速,简便,特异,灵敏度高的特点,适合基层检验机构对动物产品中氯霉素残留现场快速筛选；LC-MS法灵敏度高,适用于阳性样品的精确定量。总之,本研究所研制的氟苯尼考胶体金试纸条具有特异性强、稳定性好、灵敏度高等特点,在实际动物组织样品的氟苯尼考残留检测中所得到的检测结果与LC-MS法的检测结果较一致,可用于动物组织中氟苯尼考残留的快速检测。