【摘 要】
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目的本研究通过RNA干扰技术靶向干预OPN基因,观察OPN基因下调后非小细胞肺癌细胞株A549、SK-MES-1和OPN基因过表达后非小细胞肺癌细胞株H1703的生物学行为变化,并探讨其相关机制,为非小细胞肺癌的临床治疗提供实验基础。方法通过免疫组化、实时荧光定量PCR方法对28例Ⅰ/Ⅱ期NSCLC及73例Ⅲ/Ⅳ期NSCLC组织中的OPN的表达进行检测,分析OPN表达与临床病理参数的相关性。Wes
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目的本研究通过RNA干扰技术靶向干预OPN基因,观察OPN基因下调后非小细胞肺癌细胞株A549、SK-MES-1和OPN基因过表达后非小细胞肺癌细胞株H1703的生物学行为变化,并探讨其相关机制,为非小细胞肺癌的临床治疗提供实验基础。方法通过免疫组化、实时荧光定量PCR方法对28例Ⅰ/Ⅱ期NSCLC及73例Ⅲ/Ⅳ期NSCLC组织中的OPN的表达进行检测,分析OPN表达与临床病理参数的相关性。Western blotting检测OPN在肺癌细胞株A549、SK-MES-1、H1703和永生化人支气管上皮细胞16HBE中的表达,通过RNA干扰技术下调A549及SK-MES-1细胞株的OPN表达,对H1703细胞株的OPN进行过表达,采用MTT 比色法、Transwell侵袭试验检测各细胞系对顺铂的敏感性及侵袭能力,通过Western blotting方法检测RNA干扰后A549、SK-MES-1细胞系LDHA的表达水平,并观察乳酸水平对A549、SK-MES-1细胞系顺铂敏感性的影响。结果1、OPN在肺癌组织中的表达明显高于正常组织,并与NSCLC的转移状态、分化程度及对顺铂的敏感性相关。而OPN的表达水平与年龄、性别、病理类型及吸烟史无明显相关性,差异比较无统计学意义。2、与永生化人支气管上皮细胞16HBE 比较,Western bloting检查显示OPN在A549、SK-MES-1及H1703细胞系中表达明显增高;成功构建了 OPN RNAi慢病毒载体,Western blotting检测显示其明显抑制A549、SK-MES-1细胞系的OPN蛋白表达水平,明显增强H1703细胞系的OPN表达水平。3、MTT 比色法分析显示OPN基因下调后,A549、SK-MES-1细胞系的增殖性降低,对顺铂的敏感性增加;OPN基因上调后H1703细胞系的增殖性增加,对顺铂的敏感性降低;Transwell实验显示OPN下调后能抑制A549、SK-MES-1细胞系的迁移及侵袭能力;4、OPN的mRNA及蛋白表达水平与LDHA呈明显相关性,乳酸增加导致A549、SK-MES-1细胞系对顺铂的敏感性降低。结论1、OPN在非小细胞肺癌组织中的表达明显增高,并与非小细胞肺癌的转移状态、分化程度及对顺铂的敏感性相关。2、OPN基因过表达能有效的增强H1703细胞系的增殖性并降低其对顺铂的敏感性;OPN基因下调能有效的抑制A549、SK-MES-1细胞系的迁移及侵袭能力,增加其对顺铂的敏感性。3、OPN表达水平与LDHA呈明显相关性,OPN可通过对LDHA的调控影响A549、SK-MES-1细胞系对顺铂的敏感性。
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