背景与目的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)是影响人类健康的主要病原体之一,北京家族(Beijing family)是造成我国结核病传播的主要基因型。特别是耐多药北京家族基因型结核分枝杆菌菌株引起的暴发流行在历史上曾多次发生,所以北京型菌株与耐药之间的相关性成为了研究热点。随着分子生物学技术的发展,建立了一些有效的分子分型方法,并应用于结核病的分子流行病学监测,将有助于准确识别结核病的爆发、流行以及制定有效的防控措施。Spoligotyping技术近年来成为进一步检测结核分枝杆菌复合群并对其分型的首选方法。该方法的基本原理是基于直接重复区(DR区)的多态性。DR区只出现于结核分枝杆菌复合群中,由若干个保守的长为36bp的直接重复序列组成,并被非重复序列即间隔区分开。每个间隔区序列长为34-41bp. Spoligotyping通过扩增这些间隔区,将带有标记的扩增产物与膜上结合的43个寡核苷酸杂交,再通过增强化学发光法进行检测即可得到较为特异的结果。通常间隔区的顺序在所有菌株都是相同的,但可能会发生某一间隔区的插入或缺失,因此利用Spoligotyping就可以对结核分枝杆菌进行株水平的鉴定。应用该技术研究河南地区结核分枝杆菌的基因型分布特征及北京家族在河南的流行情况、不同基因型的年龄分布特征以及不同地域的基因型分布特征。探讨其在今后结核病控制中的应用价值。材料和方法应用WHO推荐的比例法对344株菌进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)4种药的药敏试验。应用spoligotyping分型技术对344株结核分枝杆菌临床分离株进行了基因分型。登陆http://www.miru-vntrplus.org/MIRU/index.faces网站对菌株基因型进行在线分析。对病人流行病学资料如年龄、菌株来源地等与不同基因型的相关性进行统计学数据分析,应用X2检验,P值<0.001认为有统计学意义。结果344株菌株中,有3株经软件分析为未分型的菌株。其余341株结核分枝杆菌分为4个基因群(即Beijing和Beijing近似群、T群、Manu群、S和LAM3群),24个基因型。以Beijing家族基因型分布占主导地位,其次为T基因群(包括T1、T2、T3和T4),而Manu2及s等基因型则所占比例很小。经统计学分析,MDR耐药在Beijing家族基因型中所占比例与非北京家族中所占比例差异经χ2检验无统计学意义(X2=1.46, p>0.05);一线药物任意耐药与北京家族的联系也未达到统计学的意义。河南省较年轻人群(<25、26—40、41-60)感染的结核分枝杆菌中,北京家族基因型所占比例高于年老组(即>60岁组),尤其以<25岁年龄组北京家族基因型所占比例最高,达到98.7%。本次研究所选的5个地区中,北京家族基因型所占比例存在差异,经×2检验,P<0.001,有统计学意义。结论1.北京家族基因型在河南省占87.7%(299/341),占主导地位。T群占10.5%,Manu2群、S群和LAM3群等共占1.48%。2.北京家族基因型与耐药无明显相关性,说明Beijing家族基因型与耐药间无相关性。3.河南省北京家族基因型的感染与年龄有相关性,较年轻人群(<25、26—40、41-60)感染的结核分枝杆菌中,北京家族基因型所占比例高于年老组(即>60岁组),提示近期传播的北京家族基因型在这一区域流行广泛。4.河南省北京家族基因型的分布在不同的地区间有差异,经χ2检验,差异有统计学意义。这些差异可以提示我们在监测这些地区结核分枝杆菌的流行与爆发时,应重点关注北京家族基因型。