中枢神经系统多潜能神经干细胞体外培养模型的建立及其细胞学特性的初步研究和体内移植实验

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本研究运用细胞培养技术从哺乳动物小鼠体内成功分离具有多种分化潜能的神经干细胞并建立了体外的培养模型,运用免疫细胞化学的方法证明多潜能神经干细胞具有分化出神经系统各类细胞的能力。运用核型分析的方法,证明培养的神经干细胞在体外即使经长期传代后,染色体核型仍能保持正常,但染色体的分布呈星芒状。不同部位来源的神经干细胞在培养时可表现出不同的生长特性,皮层的神经干细胞形成克隆快,但贴壁性弱;延脑和脊髓的神经干细胞形成克隆较慢,但贴壁性强。用鼠尾胶制成的三维立体培养胶观察神经干细胞克隆在其中的生长状况,表明神经干细胞克隆可以在立体培养胶内存活,培养液中FGF生长因子的存在可促进细胞迁移。培养的神经干细胞在不同的细胞外基质上生长时表现出不同的贴附和迁移特性。在鼠尾胶形成的细胞外基质上,神经干细胞克隆不易贴壁和发生细胞迁移,当鼠尾胶和poly-ornithine形成界限时,神经干细胞克隆多在poly-ornithine上贴壁并发生细胞迁移。对神经干细胞超微结构的观察表明,神经干细胞相互间可以存在缝管连接,有部分细胞表现出凋亡样结构,凋亡细胞多相邻,部分细胞有小泡样结构。在对神经干细胞受到作为第二信使的ceramide引发的应激刺激的胞内相关的信号传导路的研究中发现,正常的神经干细胞有基础水平的活化JNK/SAPK和MAPK/ERK的表达,经ceramide刺激后,胞内同凋亡相关的JNK/SAPK和同有丝分裂过程相关的MAPK/ERK通路磷酸化的水平未发现有明显变化,这对于研究体内生理性产物ceramide作为第二信使时,在神经系统发育中的功能提供了某些新的线索。通过RT-PCR和原位杂交技术证明,在培养状态下的神经干细胞可以表达参与非对称性分裂的特异基因numb,同时,也可以表达Sonic hedgehog的特异性受体patched,这为进一步研究在体外控制神经干细
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