论文部分内容阅读
头孢菌素类抗生素是治疗大肠杆菌和沙门氏菌感染最有效的抗生素之一。然而,随着抗生素在临床上的滥用及大量应用,耐药菌株不断出现,尤其是耐头孢菌素类抗生素菌株的出现已经给动物健康及动物性食品安全构成了极大威胁。相关研究表明,细菌对头孢菌素类抗生素的主要耐药机制是细菌产生了能够高效水解头孢菌素的β-内酰胺酶;从世界范围看,位于细菌质粒上的blaCMY-2基因编码的AmpCβ-内酰胺酶分布最广泛,造成的危害也最大。本研究利用PCR技术,从山东省部分地区分离的鸡源大肠杆菌和猪源沙门氏菌中分别检测到了耐头孢菌素类抗生素的blaCMY-2基因,同时将blaCMY-2阳性菌株对其他若干抗生素的敏感性进行了研究,以期为控制耐头孢菌素类抗生素的菌株引起的鸡大肠杆菌病和猪沙门氏菌病提供理论依据和研究基础。本研究共分三个部分:第一部分blaCMY-2基因的PCR检测及序列分析提取大肠杆菌和沙门氏菌分离株的质粒DNA,利用blaCMY-2基因特异性引物对各菌株进行PCR检测,结果表明,126株鸡源大肠杆菌中有15株(占11.9%)为blaCMY-2基因阳性;156株猪源沙门氏菌中有6株(占3.8%)为blaCMY-2基因阳性。另外,根据GenBank中已发表的相关DNA序列,设计一对能扩增blaCMY-2基因全序列的引物,对各阳性菌株的blaCMY-2进行序列分析,结果表明,除大肠杆菌分离株JN10的第1026位的胸腺嘧啶(T)突变为腺嘌呤(A)以及沙门氏菌分离株S103的第482位的胸腺嘧啶(T)突变为胞嘧啶(C)外,其余菌株的blaCMY-2基因全序列与GenBank中已发表的相关blaCMY-2序列的同源性为100%。第二部分blaCMY-2基因阳性菌株耐药表型检测本研究采用CLSI推荐的K-B法和微量肉汤稀释法分别检测了15株blaCMY-2基因阳性大肠杆菌和6株blaCMY-2基因阳性沙门氏菌对头孢类及其他几种抗生素的敏感性,结果表明,所有blaCMY-2阳性菌株均完全耐受第一代头孢菌素中的头孢氨苄、头孢拉定、头孢噻吩、头孢唑啉,第二代头孢中的头孢克洛,第三代头孢中的头孢克肟;此外,所有菌株对第二代头孢中的头孢呋辛、头孢孟多中度敏感部分耐药。另外,上述菌株还耐受氨苄西林、链霉素、四环素、氯霉素、阿莫西林/克拉维酸和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑,其中3株大肠杆菌(JN5、JN9和HZ9)耐受第三代头孢中的头孢曲松和头孢他啶,有3株(S90、S103、S121)和4株(S90、S103、S121、S138)沙门氏菌分别耐第三代头孢中的头孢曲松和头孢他啶。但所有分离株均对第四代头孢菌素中的头孢吡肟敏感。本研究表明,上述blaCMY-2阳性大肠杆菌和沙门氏菌分离株均为多重耐药菌株,而且耐药表型基本一致。第三部分blaCMY-2基因阳性菌株酶型检测及该基因的转移性研究本试验采用三维酶抑制试验对15株blaCMY-2阳性大肠杆菌和6株沙门氏菌进行β-内酰胺酶酶型检测;同时,利用质粒接合试验和转化试验对blaCMY-2基因的转移性进行了研究,结果发现,携带耐药基因blaCMY-2的质粒不仅能够在种内传递,而且也能够在种间传递,但是种间转移的难度大于种内。质粒转移的发生大大加速了细菌耐药性的散播,对动物和人类健康构成了极大威胁。