麻枳降浊方对便秘型肠易激综合征模型大鼠肠组织中间质细胞的影响

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目的:本研究通过冰水灌胃法建立便秘型肠易激综合征(Constipation-predominantirritablebowelsyndrome,IBS-C)大鼠模型,对IBS-C大鼠采用中药麻枳降浊方进行治疗,对大鼠一般状况、粪便含水量及粪便粒数进行统计,利用c-kit抗体作为大鼠肠道间质细胞的免疫学标记,研究麻枳降浊方对便秘型肠易激大鼠肠道平滑肌Cajal间质细胞(InterstitialcellsofCajal,ICC)分布及数量的影响,探讨麻枳降浊方治疗便秘型肠易激综合征的靶点及作用机制,为临床中医药治疗便秘型肠易激提供实验基础和理论依据。  方法:选取40只Wistar大鼠,清洁级,雄性,体重140±20g,每只大鼠分笼独立饲养,给予普通饲料适应性饲养一周,观察大鼠一般情况及粪便粒数及含水量。适应饲养期大鼠一般状况正常,未出现病态及死亡。将40只大鼠随机分为模型组(32只)与正常组(8只),模型组大鼠采用冰水灌胃法造模,造模成功后随机分为四组,中药组给予麻枳降浊方治疗;中药对照组给予复方芦荟胶囊治疗;西药对照组给予西沙比利治疗;空白对照组给予常温蒸馏水,每日灌胃一次;正常组大鼠及各治疗组大鼠正常饮食,不限食水。实验期间对大鼠粪便粒数及含水量进行观察记录,药物治疗14天后大鼠断食不断水24h,断头法处死大鼠,留取肠道组织标本。采用c-kit抗体作为胃肠道ICC的特异性标记物,通过免疫组织化学法观察各组大鼠肠组织中c-kit抗体标记ICC的表达及分布特点,并应用Image-ProPlus6.0专业图像分析系统,对c-kit免疫染色阳性细胞的面积及积分光密度进行统计分析。  结果:  (1)大鼠一般体征观察  正常组大鼠状态佳,精神好,反应敏捷,双眼有神,皮毛光泽柔顺,粪便黄褐色,呈椭圆型,长度0.7-1.1cm,质地较软,易掰开,尿量正常。模型组大鼠精神萎靡,倦怠少动,团缩拱背,易激惹,皮毛干枯毛躁,易脱落,欠光泽,粪便呈灰褐色或灰白色,小黄豆状,长约0.4-0.6cm,质地稍硬,个别不能掰开,尿量正常。中药组、中药对照组及西药对照组大鼠精神状态有所好转,皮毛较前光泽,基本接近正常组大鼠;空白对照组大鼠精神状态未见明显好转。在实验研究过程中,无大鼠死亡。  (2)大鼠粪便粒数及含水量观察  在冰水灌胃2周后,模型组与正常组比较,大鼠粪便含水量及粪便粒数显著减少,有统计学意义(P<0.05);药物灌胃2周后,中药组、中药对照组及西药对照组大鼠粪便含水量显著升高,与空白对照组相比有显著差异(P<0.05),但与正常组相比,大鼠粪便粒数及含水量有统计学意义(P<0.05);各治疗组组间相比粪便含水量及粪便粒数无显著差异(P>0.05)。  (3)大鼠肠组织病理观察  镜下观察各组大鼠结肠、小肠及回盲部结构完整,未见充血、水肿、糜烂等异常病理改变。光镜下正常组大鼠ICC多分布于结肠及小肠肌间神经丛周围,回盲部较少。ICC胞体较大,形态多样,呈纺锤形或卫星形,有2个或2个以上的细胞突起,占细胞大部分,胞质较少。空白对照组大鼠肠道ICC形态及分布与正常组相似,主要分布在肌间神经丛和肌深丛,但表达较少,由ICC突起相连所形成的带状或网状结构也少见或不明显。光镜下各治疗组大鼠肠组织内c-kit阳性ICC的形态、分布及其之间连接与正常组大鼠无显著差异。  (4)大鼠肠组织内Cajal间质细胞表达  中药组、中药对照组及西药对照组大鼠结肠、小肠、回盲部c-kit阳性细胞与空白对照组大鼠相比明显增强(P<0.05);与正常组大鼠相比,表达相似,但仍有统计性差异(P<0.05)。各治疗组间相比,无统计学差异(P>0.05)。  结论:通过冰水灌胃法模拟人类饮食生冷后胃肠道粘膜受损,血管收缩,进而出现腹痛、便秘、消化不良、肠道敏感性降低等症状,成功建立IBS-C模型,体现了肠道运动异常、内脏敏感性增加等肠易激综合征的发病特点,为IBS的动物实验研究提供基础及支持。麻枳降浊方干预性治疗的IBS-C大鼠肠道ICC的IOD及阳性面积有所升高,虽然较正常组有所差异,各治疗组有显著改善趋势,推测其通过对IBS-C模型大鼠结肠、小肠及回盲部平滑肌ICC数量及超微结构改善,增强肠道传导功能,增加粪便含水量,从而改善便秘,为中药复方治疗便秘型肠易激综合征提供实验基础和理论支持。
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