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目的:自身免疫甲状腺病(Autoimmune thyroid diseases，AITD)是常见的器官特异性自身免疫病，主要包括:Graves病（Gravesdisease，GD）、Graves眼病(Gravesophthalmopathy，GO)和自身免疫性甲状腺炎(Autoimmunethyroiditis，AIT)，共同的临床特征是血清甲状腺自身抗体阳性、甲状腺/眶周组织中淋巴细胞浸润。AITD在我国人群中的发病率约为10％，主要危害是甲状腺功能异常引起的代谢紊乱。AITD是遗传和环境因素共同作用下的免疫稳态失衡，具体病因尚不明确。碘是AITD发病的重要环境因素，高碘地区AITD发病率显著升高;T、B淋巴细胞功能紊乱和比例变化是AITD重要的免疫学发病机制。近年来，x染色体偏倚失活、小RNA干扰等表观遗传学修饰调控也被证实参与AITD的发生和发展，而目前缺乏DNA甲基化参与AITD发病的数据。因此，本研究的前期工作旨在探讨T、B淋巴细胞DNA总体甲基化修饰在AITD患者和SAT动物模型中的作用，并设计随访研究观察临床治疗对AITD患者淋巴细胞DNA总体甲基化水平的影响。 GO是AITD中较为严重的一种临床类型，临床表现以突眼为特征，诊断及治疗不及时会给患者带来容貌改变、眼部疼痛、复视、致盲等严重后果。多种甲状腺疾病可引起GO眼部损害，其中97％为GD，其次为桥本病、甲状腺腺瘤、甲状腺癌等。突眼度值是临床上评估GO严重度和活动度的一个重要指标，而突眼度值的诊断价值建立于精准的测量方法和适合的正常参考范围。目前，我国GO突眼的诊断仍然以其他国家和种族的正常参考范围为诊断依据，而大量文献证实不同人群和种族的突眼度参考范围存在异质性，故很有必要在中国巨大的人口中建立特异性的突眼度正常参考范围。本研究在中国东北沈阳地区汉族人群建立正常双侧眼球突出度参考范围以帮助专科医生有效诊断突眼病指导治疗。 研究方法: 第一部分:4周龄NOD.H-2h4小鼠、昆明小鼠各20只，每组随机分为高碘饮水组(HI)及正常碘饮水组(CON)。于高碘干预16周后处死小鼠，取血清测定甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulin antibody，TgAb)滴度，小鼠甲状腺组织石蜡包埋、切片、HE染色并评估甲状腺炎程度;同时取小鼠脾脏制备单个核细胞悬液，流式分选CD3+T细胞、CD19+B细胞，分别提取DNA和RNA，检测细胞DNA总体甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNA Methyltansferases，DNMTs) mRNA表达水平。 于2013年8月-2014年10月在中国医科大学附属第一医院内分泌门诊及无锡江原医院内分泌门诊收集初发GD患者51例、初发AIT患者28例、单纯抗体阳性者29例;于中国医科大学附属第一医院体检中心随机选取志愿者38例做为对照组。纳入标准:1）性别不限。2）年龄15-70岁。3）弥漫性甲状腺肿，甲状腺功能亢进，TRAb＞10 U/L者纳入初发GD组;甲状腺功能减退，TPOAb/TgAb＞300 IU/ml者纳入初发AIT组;未经治疗的，甲状腺功能正常，仅TPOAb/TgAb升高者纳入单纯抗体阳性组;甲状腺自身抗体正常，甲状腺功能正常，性别、年龄与病例组相匹配的健康者纳入对照组。排除标准:1）既往患甲状腺疾病，服用药物治疗者或放射碘、手术治疗史。2）其他自身免疫病、慢性炎症性疾病、肿瘤、近期严重感染（肝炎等）病史;一个月内曾应用免疫抑制剂或免疫调节剂。以上各组研究对象记录性别、年龄，血清检测游离三碘甲腺原氨酸(Free triiodothyronine，FT3)、游离甲状腺素(Free thyroxine，FT4)、促甲状腺激素释放激素(Thyroid stimulating hormone，TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(Thyroid peroxidase antibody，TPOAb)、TgAb，初发GD组患者增加促甲状腺激素受体抗体(TSH receptor antibody，TRAb)检测。抗凝静脉血分离单个核细胞，流式分选CD3+T细胞、CD19+B细胞，分别提取DNA、RNA，检测细胞DNA总体甲基化水平，DNMTs mRNA表达水平。 初发GD组其中17例给予规律抗甲药治疗，34例给予放射碘治疗;初发AIT组给予左甲状腺素替代治疗。以上患者均在治疗3个月后进行随访。血清检测FT3、FT4、TSH、TPOAb、TgAb以评估治疗效果，初发GD组患者加测TRAb。抗凝静脉血分离单个核细胞，流式分选CD3+T细胞、CD19+B细胞，分别提取DNA、RNA，检测细胞DNA总体甲基化水平，DNMTs mRNA的表达水平。 第二部分:在中国东北沈阳地区随机选取年龄在8-87岁的正常汉族人群2010人，其中女性1051人、男性959人，并排除患有可影响眼眶或眼球的全身或局部疾病病史的人群。入组研究对象按年龄分为4组:儿童组（8-14岁）515例;青少年组（15-19岁）517例;成人组（20-69岁）582例;老年组（70-87岁）396例。利用Hertel突眼计测量人群双眼突眼度及眶距。突眼度正常参考范围的上限被定义为均值+2个标准差，得出中国东北沈阳地区汉族人群特异性的正常突眼值参考范围。 结果: 第一部分:1、NOD.H-2h4小鼠-HI血清TgAb OD值明显增高，甲状腺炎评分升高，与NOD.H-2h4小鼠-CON组相比有显著统计学差异(P＜0.001)。昆明小鼠高碘饮水组及正常碘饮水组均未发生甲状腺炎。NOD.H-2h4-HI小鼠CD3+T、CD19+B细胞中DNA总体甲基化水平及DNMTs mRNA的表达水平与其他组相比均无明显差异(P＞0.05)。CD3+T细胞、CD19+B细胞中DNMTs mRNA表达水平及DNA总体甲基化水平与血清TgAb OD值之间无明显相关性（P＞0.05）。 2、初发GD组患者CD3+T、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平与对照组相比明显降低，有显著统计学差异(P＜0.001);初发AIT组CD19+B细胞DNA总体甲基化水平与对照组相比明显降低，有显著统计学差异(P=0.001)，而初发AIT组CD3+T细胞DNA甲基化水平与对照组相比无明显变化;单纯抗体阳性组CD3+T、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平与对照组相比无差异(P＞0.05)。初发GD组患者CD3+T、CD19+B细胞DNMT1 mRNA表达水平与正常对照组相比均明显降低，有显著统计学差异(P＜0.001)，而CD3+T、CD19+B细胞DNMT3a、DNMT3b水平与对照组无差异;初发AIT组患者CD19+B细胞DNMT3a mRNA表达水平与正常对照组相比明显降低，有显著统计学差异(P=0.03)，而CD19+B细胞DNMT1、DNMT3b mRNA表达水平及CD3+T细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比均未见统计学差异;单纯抗体阳性组CD3+T、CD19+B细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比均无差异。 3、初发GD组患者治疗3个月后CD3+T、CD19+B细胞中DNA总体甲基化水平较治疗前升高，有显著统计学差异(P＜0.001，P=0.004)。其中，初发GD患者药物治疗组治疗后CD3+T、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平较治疗前明显升高，有明显统计学差异(P=0.007，P=0.006);初发GD患者放射碘治疗组治疗后CD3+T细胞DNA总体甲基化水平增加，与治疗前相比有统计学差异(P=0.01)，而CD19+B细胞DNA总体甲基化水平治疗前后无明显统计学差异(P=0.230)。初发GD组患者治疗3个月后CD3+T、CD19+B细胞中DNMT1 mRNA表达水平较治疗前增加，有统计学差异(P＜0.001，P＜0.001)，而DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA表达水平治疗前后相比无统计学差异。初发GD患者药物治疗组和放射碘治疗组DNMT1 mRNA表达水平都明显升高，与治疗前相比有明显统计学差异(P＜0.001)。初发AIT组患者左旋甲状腺素替代治疗后CD3+T、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平及DNMTs mRNA表达水平与治疗前相比有升高但未达到统计学差异(P＞0.05)。 第二部分:1、总体眼球突出度值范围为10 mm-22 mm，均值左眼15.0 mm±1.9mm，右眼15.0 mm±2.0 mm。双侧眼球正常突眼度上限值（平均值+2SD）分别为:儿童组:左16.9mm，右16.7mm;青少年组:左18.1mm，右18.3mm;成人组:双侧均为19.3mm;老年组:左19.7mm，右19.9mm。 2、研究对象总体眶距范围为87 mm-122 mm，均值为107.6 mm±6.3 mm。 3、各年龄组人群的左、右眼球突出度具有显著的相关性。儿童组和青少年组年龄和突眼度值呈明显正相关，而老年组年龄和突眼度值呈负相关。所有年龄组人群中，双眼突眼度值和眶距呈正相关。 结论:1、NOD.H-2h4小鼠SAT模型T、B淋巴细胞DNA总体甲基化水平及DNMTs mRNA表达水平较非甲炎组小鼠无改变，说明T、B淋巴细胞DNA总体甲基化不参与小鼠SAT发病。昆明小鼠高碘组与正常碘组相比T、B淋巴细胞DNA总体甲基化水平及DNMTs mRNA表达水平无差异，说明高碘并不影响DNA总体甲基化修饰水平。 2、初发GD患者外周血CD3+T细胞、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平较对照组降低，提示DNA甲基化修饰与GD患者的发病有关;DNMT1 mRNA表达减少可能是其DNA总体甲基化水平降低的原因。初发AIT患者CD19+B细胞DNA总体甲基化水平与B细胞DNMT3a mRNA表达水平较对照组降低，而CD3+T细胞总体甲基化水平及DNMTs mRNA表达水平与对照组无差异，提示DNMT3a介导的B细胞DNA总体甲基化修饰参与AIT发病，而T细胞总体甲基化修饰可能与AIT发病无关。 3、初发GD患者经有效的临床治疗后，CD3+T细胞、CD19+B细胞DNA总体甲基化水平和DNMT1 mRNA表达水平较治疗前升高，提示药物或放射碘治疗可能通过影响淋巴细胞DNA总体甲基化修饰而改善临床症状。初发GD患者药物治疗组CD3+T细胞、CD19+B细胞DNA甲基化水平均升高，而放射碘治疗组治疗后只有CD3+T细胞DNA总体甲基化水平增加，而CD19+B细胞DNA总体甲基化水平治疗前后无统计学差异，这提示药物治疗和放射碘治疗可能改变不同的淋巴细胞亚群的DNA甲基化水平。 4、建立了中国东北沈阳地区汉族人群特异性突眼度正常值。双侧眼球正常突眼度上限值（平均值+2SD）分别为:儿童组:左16.9mm，右16.7mm;青少年组:左18.1mm，右18.3mm;成人组:双侧均为19.3mm;老年组:左19.7mm，右19.9mm。与目前文献提出的西方国家的标准有一定差异。