西瓜杂交种纯度快速鉴定方法的研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hafuu
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本研究利用AU-PAGE 电泳方法、SRAP 技术和SSR 技术,对20 个西瓜杂交种和2 个西瓜杂交组合及其亲本的遗传多样性和纯度鉴定等方面进行了研究,并对相关技术体系进行了优化和改进。建立了西瓜杂交种纯度的SRAP 鉴定方法。主要研究结果如下: (1)SRAP 技术可以用于西瓜杂交种的纯度鉴定:3 对SRAP 引物ME-6/EM-2、ME-6/EM-3、ME-2/EM-1 可以用于西丰1 号及其亲本的纯度鉴定,3 对引物ME-1/EM-2、ME-1/EM-3、ME-8/EM-6 可以用于西丰2 号及其亲本的纯度鉴定。19 对引物在20 个西瓜杂交种之间能产生多态性,可以利用其中鉴别能力较高的引物进行杂交种纯度鉴定。对4 个西瓜杂交种进行SRAP 纯度鉴定,ME-2/EM-5 扩增结果与田间种植纯度鉴定结果符合率在93.8~96.8%之间,SRAP 鉴定纯度低于田间种植鉴定纯度结果,表明SRAP 技术的检杂能力高于田间种植鉴定。 (2)优化建立了适于西瓜DNA分析的SRAP技术体系:适用于SRAP分析的DNA提取方法为常规法,将提取叶片DNA改为提取种子DNA。对不同的DNA提取方法进行对比,将叶片提取DNA改为种子提取DNA。优化了西瓜的SRAP反应体系(每25ul反应体系中含有DNA模板30ng,引物5pmol,Mg2+ 3mM,Taq酶0.5U,dNTPs0.2mM),并对扩增产物的检测技术作了优化。 (3)SRAP 引物的筛选和多态性分析:25 个SRAP 引物组合用于扩增当前推广的20 个西瓜杂交种,发现19 个引物能产生多态性,共产生135条多态性条带,单个引物组合的多态性比率在13~68%之间。根据19 对多态性引物扩增结果对20 个品种进行聚类分析,在相似系数为0.57 的水平上,可以将20 份材料分为3 大类,Jaccard’s 相似系数在0.29~0.86
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