DPN的六经证治规律挖掘及其关键方药的作用机制初探

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目的:对一附院内分泌科六经辩治糖尿病周围神经病(DPN)的病案信息进行数据挖掘,总结其治疗思想及用药规律;对其中的关键基础用药进行网络药理学分析,初步探讨其作用机制、阐释其科学性,为后续研究提供依据与思路。方法:(1)通过文献研究系统梳理目前关于DPN的中西医发病现状及治疗研究概况。(2)收集一附院内分泌科病房符合纳入标准的DPN病案数据230份。对其进行整理及规范后,基于R软件功能,运用频数统计、关联规则分析、因子分析、聚类分析等方法相结合进行整体分析和分层研究,总结一附院内分泌科DPN的中医药治疗思想及用药经验。(3)选取其中基础关键用药进行网络药理学分析。运用TCMSP平台选取中药活性成分及作用靶点,通过六大权威疾病靶点数据库检索DPN相关靶点;基于Cystoscape的基本功能及Biso Genet插件,分别构建中药-活性成分-靶点网络及中药靶点-DPN靶点相互作用网络。对其进行拓扑分析获取核心靶点,基于R软件对关键靶点互作网络进行GO功能注释及KEGG通路富集分析。结果:(1)一般情况:纳入的病例年龄范围在25-89岁,男女发病数未见明显差异,发病病程在数年到数十年不等。症状上以肢体麻木为主症,伴随口干、多饮、乏力、疲倦、眠差、感觉异常、下肢疼痛、四肢不温、腹胀纳差等症。并发症方面,多见四肢动脉、颈动脉、心脑血管的动脉粥样硬化改变或阻塞。证型上,阴经病证约占60%,阳经病证约占40%,其中少阴虚寒湿盛证例数居六经之最,阳经病证中少阳经证最高发。(2)中药治疗规律:用药主归脾、肺、心、胃、肝、肾、膀胱、胆经;以补益药、解表药、温里药、清热药、利水渗湿药最为常用,常配伍祛风湿药、化湿药、活血药、化痰止咳平喘药等。频数统计获得治疗DPN高频用药(使用频率≥10%)35味。由关联规则分析得出各证型下关键用药,其中风寒湿阻滞太阳经络证关键用药为桂枝、生姜、大枣、甘草、黄芪;寒湿阻滞少阳经脉证关键用药柴胡、黄芩、半夏、干姜、桂枝、白芍、生姜、甘草;太阴与阳明同病-湿热阻络证的关键用药为茵陈、当归、苍术、羌活、防风、泽泻、黄芩、甘草;寒湿阻滞厥阴经脉证关键用药为当归、细辛、桂枝、白芍、甘草、附子、吴茱萸、生姜、大枣;上热下寒、邪犯厥阴证关键用药为干姜、乌梅、黄连、当归、细辛、桂枝。得出核心二联规则桂枝-白芍、核心三联规则柴胡-黄芩-半夏、核心四联规则白术-附子-黄芪-茯苓。通过因子分析筛选出6个公因子,共包含29种核心中药,聚类分析将其聚为6类。不同的聚类中药为不同证型DPN的治疗要药。(3)少阴证分层研究:少阴虚寒湿盛证的关键用药为附子、茯苓、白术、干姜、红参、桂枝、白芍、黄芪、生姜、甘草等;得出白术-茯苓-附子这一核心规则;因子分析筛选出4个公因子,包含22种关键用药,聚类分析聚为3类,其中聚3类方组成附子汤、理中汤、黄芪桂枝五物汤、桂枝人参汤、真武汤合方。(4)网络药理学分析:入选的基础关键方药(桂枝、白芍、黄芪、生姜、干姜、白术、附子、茯苓)含82个活性成分、228个作用靶点。其中治疗DPN的直接作用靶点30个;核心靶点包括HSP90AA1、AKT1、PPARG、SOD1、NOS3、PTGS2、TGFB1、IL6、IL4等;涉及神经元细胞体、轴突细胞质等作用场所,涉及物质代谢与调控、氧化应激反应、活性氧化物的生成、血管内皮细胞迁移与调控、急性炎症反应等多个生物过程。其参与AGE-RAGE信号通路、TGFβ信号通路、PI3K-Akt信号通路、NF-κB信号通路、VEGF信号通路及其他代谢疾病通路和炎症信号通路等多条通路。结论:DPN的治疗以扶阳运阳、祛邪通络为总原则。用药上重益气温阳、从表散邪、清热利湿、淡渗利湿、行气化湿,兼顾化痰、润肠、生津、活血等。其中少阴虚寒湿盛证治以温阳散寒除湿,常用到附子汤、理中汤、黄芪桂枝五物汤、桂枝人参汤、真武汤合方。风寒湿阻滞太阳经络证治以益气温经、和血通络,常用黄芪桂枝五物汤。寒湿阻滞少阳经脉证治以和解少阳、疏通经脉,常用柴胡桂枝干姜汤。太阴与阳明同病-湿热阻络证治以清热利湿、祛风通络,常用当归拈痛汤。寒湿阻滞厥阴经脉证治以温经散寒除湿、养血活血通脉,治以当归四逆汤。上热下寒、邪犯厥阴证寒温清并用,以乌梅丸治之。临证常用桂枝-白芍调和营卫、柴胡-黄芩-半夏和解枢机、白术-附子-黄芪-茯苓温阳益气除湿。八味基础关键用药发挥对DPN的多靶点、多通路整体治疗效应,其潜在作用机制之一,是通过抑制AGE-RAGE通路活性,进而调控PI3K-Akt信号通路等多条中下游通路,从而产生抗氧化、抗炎、调节血糖等治疗效应。
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