鸡新城疫(ND)、呼吸型传染性支气管炎(IB)、减蛋综合征(EDS76)、禽流感(AI)近年来在禽类特别是蛋鸡养殖过程中频繁发生。在我国多使用弱毒苗和灭活单苗、二联、三联苗预防上述疫病。我们引进鸡新城疫病毒、呼吸型传染性支气管炎、减蛋综合征三株标准毒,筛选出毒力低、免疫原性好的H9亚型NJ02毒株,并解决了联苗生产过程中比较关键的浓缩技术,试制出鸡新城疫、呼吸型传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感(H9)四联油乳剂灭活疫苗。1、生产毒种的鉴定：将从中国兽医药品监察所引进的鸡新城疫病毒(La Sota株)冻干毒种、呼吸型传染性支气管炎病毒(M41株)、减蛋综合征(AV127株),同时对三株禽流感地方毒株进行了生物学和免疫学研究。结果表明,三株毒株均为低致病性禽流感,鸡胚繁殖毒价高(病毒含量>10g-3 EID50/0.1m1),其中的NJ02毒株的免疫原性最好,血清HI抗体效价大于10 1og2,不但能完全抵抗同源病毒攻击,异源攻毒保护率也高达80%以上,确定为制苗毒株。将以上各株病毒经SPF鸡胚或易感鸭胚复壮后,按《中华人民共和国兽用生物制品规程》2000年版中相应毒种标准进行了全面鉴定,合格后又在SPF鸡胚或易感鸭胚上连续传至E15代,确定四个毒株传代的稳定性。对各株种毒进行冻干或-20℃保存,并进行各项检验,结果均符合各毒株毒种标准,作为种子保存备用。并对四种毒种E10代种毒进行外源病毒检验,鸡胚检验部分由本试验室进行,鸡检验部分由山东省家禽研究所代检。两试验结果表明：以上四种毒种均纯净,无外源病毒污染。2、生产工艺优化：使用超滤仪对四种抗原进行超滤浓缩,试验结果表明：抗原浓缩前后病毒含量及HA效价与抗原浓缩倍数呈正相关。超滤后尾液中无病毒泄漏,抗原回收率接近100%；对四种毒株的抗原原液与浓缩抗原分别做了灭活动力学测定。通过血凝试验方法对四种灭活抗原进行了2-8℃保存期试验。结果表明：对于灭活检验、无菌检验均合格灭活抗原,在2-8℃下保存,鸡新城疫、减蛋综合征(AV127株)的保存期不超过4个月,传染性支气管炎的保存期在9个月以上,禽流感(H9)的保存期在6个月以上。3、安全性评价：将四种抗原按一定比例混合,制成四联苗。用1月龄SPF鸡(来航)、7月龄产蛋鸡(伊莎)、9日龄三黄肉鸡,进行了四联苗单剂量、单剂量重复及超剂量接种,14天内未出现由疫苗引起的任何局部和全身反应,产蛋鸡产蛋率未发生变化。说明四联苗是安全的。4、效力检验标准制定：通过免疫攻毒试验和血清学方法分别对鸡新城疫、传支、减蛋综合征和禽流感(H9)抗原含量标准、效力检验方法及质量标准进行研究,确定了该制品中抗原含量和质量标准草案。五、免疫效力评价：对三批次疫苗进行效检,均达到相应标准。免疫期及保存期试验结果表明,该制品免疫期为5个月,2-8℃保存期为12个月。