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小肠移植是治疗不可逆肠衰竭的最终有效方法。免疫抑制剂的进展使小肠移植得以应用于临床。但是移植物的失功限制了临床小肠移植的成功和广泛应用。大鼠的异位小肠移植的模型首先由Mondik和Russel建立,用于免疫学的研究。这种模型的主要优点是技术简单、低死亡率。一步法原位小肠移植模型由Kort建立,是小肠生理学研究的最佳模型。但高死亡率使其应用远不及异位小肠移植。本研究建立了一种改进的,更加安全的二步法大鼠原位小肠移植模型。
小肠对营养物质的吸收是小肠重要的生理功能,了解移植后小肠的功能变化是研究移植小肠功能恢复的基础。国内对小肠移植免疫学和技术方面进行了大量的研究,但对小肠移植后吸收功能的变化研究较少。国内以往的研究多采用的是异位小肠移植模型或有免疫反应的动物模型。由于异位移植不符合小肠的生理,存在废用性萎缩,故不适于移植小肠生理学的研究;而有免疫反应的模型难以判断移植小肠术后功能低下是由于排斥反应引起,还是移植小肠在去神经、淋巴回流障碍、缺血再灌注损伤后的正常生理过程,也不能清楚地揭示术后移植小肠的功能变化。本研究在二步法大鼠原位小肠移植模型基础上,监测移植术后不同时段移植小肠对15N-Gly的吸收和肠道功能酶的变化,揭示了同基因大鼠原位小肠移植后移植小肠的吸收功能的变化。
临床肝肠移植术后,移植肠遭受缺血-再灌注、去神经、淋巴回流障碍、免疫排斥反应,长期免疫抑制治疗等损伤,功能受损严重。因此在促进移植肠功能的恢复时,要在多个水平和层面阻止损伤,促进恢复。应用代谢调理治疗,不但可提供移植术后所需的一般和特殊营养底物,而且通过生长激素、特殊营养底物的调理作用可促进移肠和受体自身器官细胞功能的恢复。
第一部分二步法大鼠原位小肠移植模型的建立目的:建立稳定可靠的二步法大鼠原位小肠移植模型。
方法:选用近交系Wistar大鼠作供、受体。参照Kort的方法,并加以改进,血管重建采用供体的带肠系膜上动脉的腹主动脉和受体腹主动脉端侧吻合、供体门静脉和受体左肾静脉端端套管吻合。受体第一步手术时,供肠远端端侧吻合于受体的末端回肠,已结扎的供肠近端固定于右侧腹壁(不做腹壁造口);七天后行第二步手术,自Tritze韧带下1cm到回回肠吻合口上1cm切除受体小肠,受体空肠残端端侧吻合于供肠近端。
结果:共进行140次二步法大鼠原位小肠移植手术。其中预实验阶段行106次,手术成功率50%。正式实验34次,手术成功率90%。手术耗时约175±15分钟。其中供体手术时间约60±10分钟;供肠修整8±3分钟;受体第一次手术时间约50±15分钟,其中动脉吻合时间约为20±5分钟,静脉吻合时间2±1分钟,移植肠温缺血时间(自冷保存液中取出至恢复血液供应的时间)约为2±1分钟,移植肠冷缺血时间(动脉冷灌注开始至恢复血液供应的时间)约为30±5分钟。受体第二次手术时间约35±15分钟。
结论:我们采用的二步法大鼠原位小肠移植方法安全、可靠,有助于移植小肠从缺血再灌注损伤中恢复,减少了严重的肠道吻合口并发症,并提高了大鼠的术后生存率,可以建立稳定的小肠移植模型,满足后继实验的要求。
第二部分移植小肠吸收功能的研究目的:了解同基因原位小肠移植后移植小肠的吸收功能。
方法:采用第一部分建立的二步法大鼠原位小肠移植模型,分别于二周、四周、八周检测移植小肠15N-Gly的吸收和移植小肠功能酶(Na+,K+-ATP酶、乳糖酶、蔗糖酶、麦芽糖酶)活性。
结果:对15N-Gly的吸收和小肠功能酶活性在原位移植术后二周下降明显,八周时接近正常水平。
结论:大鼠小肠原位移植后,移植小肠吸收功能在八周左右时接近正常水平。
第三部分代谢调控治疗促进肝肠移植患者移植肠功能的恢复目的:探讨代谢调控治疗在肝肠联合移植病人术后的应用。
方法:肝肠移植术后第1d开始给予全肠外营养(TPN)添加谷氨酰胺双肽和精氨酸,术后第4d开始给予肠内营养添加谷氨酰胺(Gln)和精氨酸,间歇应用生长激素(GH)四个疗程,根据肠功能的恢复情况逐渐由肠外营养向肠内营养过渡。
结果:移植器官功能恢复良好,术后30d病人能够较好地耐受肠内营养。
结论:应用代谢调控治疗有利于肝肠联合移植术后移植肠功能的恢复。