【摘 要】
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应用RT-PCR方法从紫花苜蓿超级阿菠萝(Medicago sativa L.cv.Apollo Supreme)中克隆出促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)基因家族中的MsMMK4基因的
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应用RT-PCR方法从紫花苜蓿超级阿菠萝(Medicago sativa L.cv.Apollo Supreme)中克隆出促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)基因家族中的MsMMK4基因的全长cDNA。序列分析表明,克隆到的.MsMMK4基因的cDNA序列全长1116bp,ORF为1113bp,编码371个氨基酸。与GeneBank上MsMMK4(登录号:X82270)基因的cDNA序列相比,有14个碱基的改变,同源性为98.74%,但由此推导的氨基酸序列完全相同。将此cDNA片段与含有诱导型启动子rd29A的植物表达载体pRDN连接,构建成植物表达载体pRMN,与含有组成型启动子CaMV35S的植物表达载体pPZP22连接,构建成植物表达载体pPZM。
上述重组表达载体经农杆菌介导转化烟草,获得相应庆大霉素抗性转化植株,PCR检测结果证明目的基因已整合到烟草基因组中。pRMN和pPZM植物表达载体转化烟草分别获得6株和10株转基因株系。干旱处理8天时pRMN转基因烟草植株生长正常,未出现萎蔫状态,而野生型烟草植株从根部往上1~6片叶子开始出现萎蔫状态,干旱处理12天时部分pRMN转基因烟草植株也有1~5片叶子出现萎蔫状态,而野生型烟草植株严重萎蔫状态,转基因烟草表现出耐早性状。转化CaMV35S的转基因植株与rd29A的植株相比生长缓慢,植株矮小。
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