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目的:(1)结合临床远期疗效分组对比观察化岩胶囊和化疗药物对骨肉瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和环氧化酶2(COX-2)表达及肿瘤微血管密度(MVD)的影响。
(2)探讨化岩胶囊药物血清对骨肉瘤细胞系MG-63作用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。
方法:(1)回顾分析了河南省洛阳正骨医院1999.1~2005.1收治经病理确诊并可随访的50例患者依据治疗方案不同分为中药组、化疗组、中药化疗组、未干预组。各组对比分析治疗保肢率、远期生活质量和各年生存率;所有经病理确诊而未做任何治疗的骨肉瘤组织标本和13例正常骨组织标本采用SABC免疫组化方法检测VEGF、COX-2表达情况,并采用CD34标记微血管内皮细胞,进行肿瘤微血管密度MVD定量及三者相关性分析。各组治疗后的骨肉瘤组织标本也做三者检测,并用统计学分析软件spss11.5对比分析组间差异及与远期疗效的相关性。
(2)采用鸡胚绒毛尿囊膜接种骨肉瘤细胞系MG-63细胞的方法随机、对比、双盲研究化岩胶囊药物血清对血管生成的影响。SD大鼠药物喂养7天制备药物血清及空白血清。实验种蛋随机分为4组:药物血清HX组、空白血清KX组、PB组及空白QY组。造模种蛋无菌开窗后在尿囊膜上接种浓度为18.6×106的肿瘤细胞悬液100ul,通过明胶海绵载体每天给予药物血清、空白血清及PBS干预,空白QY组开窗后直接加入明胶海绵载体并PBS干预。每天记录CAM的血管数目、形态、肿瘤生长情况等,并拍照图像分析血管直径和面积。连续观察3天后取CAM标本,肿瘤组织及部分CAM采用SABC免疫组化方法检测VEGF、COX-2表达情况。实验结果采用统计软件spss11.5对比分析各组差异及与CAM血管面积的相关性。
结果:(1)所有未经治疗的骨肉瘤组织中VEGF、COX-2的阳性表达率分别为87.50%、69.84%,与正常骨组织42.86%、14.29%比较有显著性差异(P<0.05);各组治疗前后VEGF和COX-2表达无统计学差异;骨肉瘤组织MVD与正常骨组织MVD比较有显著性差异(P<0.05),中化组治疗前后MVD比较有差异(P<0.01),中化组治疗后MVD低于正常骨组织的MVD(P<0.01);中药组、中化组及化疗组患者5年生存率与未治疗组比略有优势,但无统计学差异(P>0.05),而且与MVD、VEGF、COX-2相关性不佳。
(2)骨肉瘤MG-63细胞系细胞能促进CAM血管生成,且主要促进血管以大中血管为主,属1级血管者多,药物血清对CAM血管作用具有抑制作用趋势;标本PB组与QY组血管面积差异有统计学意义(P<0.05),药物血清组可抑制血管生成(与PB组比较P<0.05),且能减少血管异生现象;肿瘤组织及CAM中VEGF、COX-2阳性表达率较空白QY组有差异(P<0.05),但各组间无明显差异(P>0.05)。结论VEGF、COX-2在骨肉瘤组织中高表达,且与MVD正相关,化岩胶囊具有抑制肿瘤组织血管生成的作用,但可能不是以VEGF和COX-2为主要调节因子,而且治疗过程可能还具有其他可促进血管生成因素存在。