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目的：胃癌(Gastric cancer, GC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，因其病死率高，对人类的健康和生命构成了严重威胁。近年来，人们已注意到线粒体DNA(mitochondria DNA，mtDNA)突变及单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms, SNPs)与肿瘤的发生发展有关。人类mtDNA是一条长为16569bp的双链闭环分子，是细胞内唯一存在的核外遗传物质，包含37个基因，其中13个参与编码电子传递链复合体的亚单位，另外的2个rRNA基因和22个tRNA基因，主要参与线粒体内蛋白质的合成。D-环区(D-Loop区)是mtDNA的非编码区，包含mtDNA的复制起始位点和转录启动子，是mtDNA分子复制和转录的调控中心。对包括胃癌在内的多种恶性肿瘤的研究发现，D-Loop区是mtDNA突变及多态性的热点区域。SNPs是基因组DNA序列中由于单个核苷酸变异引起的多态性，被广泛应用于多基因疾病的易感基因研究领域。本研究通过PCR产物直接测序的方法，对145例胃癌患者及159例正常人群外周血mtDNAD-Loop区的SNPs进行检测，并分析和胃癌发病相关的SNPs与患者临床特征的关系，以探索D-Loop区SNPs在胃癌形成和发展中的作用，为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供新思路。方法：1研究对象及标本采集：选取2007年9月-2008年7月于河北医科大学第四医院外三科住院且行根治术的胃癌患者145例，术前均经内镜检查、组织病理确诊为胃癌。在获取患者知情同意后，采集外周静脉血标本3ml，准确记录所有患者的临床特征。另选取2011年10月-2012年5月期间在河北医科大学第四医院体检的159例正常人作为对照组，详细记录体检资料，并除外与胃癌相关的疾病，采集外周静脉血标本3ml。所有标本的采集均经过河北医科大学第四医院伦理委员会批准。2线粒体DNA提取、扩增及测序：采用DNA纯化试剂盒提取胃癌患者及对照组人群静脉血标本的线粒体DNA，DNA经定量鉴定合格后，采用PCR技术扩增目的片段，上游引物为：5’-CCCCATGCTTACAAGCAA-GT-3’，下游引物为：5’-GCTTTGAGGAGGTAAGCTAC-3’。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶纯化后，进行DNA测序，测序反应采用ABI PRISM BigDyeTerminator v3.1循环测序反应试剂盒，所用仪器为ABI PRISM3730XL测序仪。同一标本采用双向重复测序。3统计分析：采用u检验比较计量资料，采用χ2检验比较计数资料，并计算P值、相对危险度（OR）、95%可信区间（CI）。实验数据均采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，P＜0.05被认为有统计学意义。结果：1胃癌组与对照组临床资料对比：年龄、性别在两组之间无显著性差异(P>0.05)。2在145例胃癌患者及159例对照组人群全长为982bp测序序列中，与剑桥序列相比，共找出152个多态性变异位点，多态率为15.5%，新发现的变异数是7个，两组中高频率的多态性变异数是27个。3将胃癌组与对照组D-Loop区的SNPs分布频率进行比较分析，共发现5个多态性变异位点（73G/A、309C/C insert、523-524AC/del、16362T/C、16519C/T）与胃癌的发病风险相关。其中，73G基因型在胃癌组的分布频率是100%，对照组是56.0%，胃癌组明显高于对照组（P=0.000）。在309位点，有64例（44.1%）胃癌患者存在1个或2个碱基C的插入，对照组中有101例（63.5%），309C insert分布频率胃癌组明显降低（P=0.001）。在523-524位点，胃癌组有71例（49.0%）患者AC碱基缺失，对照组有57例（35.8%），胃癌组明显高于对照组（P=0.021）。另外，研究发现16362C基因型在胃癌组分布频率是29.0%，对照组是47.2%，胃癌组低于对照组（P=0.001）。16519C基因型的分布频率在胃癌组是62.1%，明显高于对照组的49.1%（P=0.023）。4将与胃癌发病相关的SNPs和患者临床特征进行比较分析，结果显示16362C基因型在≤60岁组（38.0%）中的分布频率较＞60岁组（20.3%）高（P=0.018），16519C基因型的分布频率在无脉管瘤栓组（68.6%）比有脉管瘤栓组（45.0%）高（P=0.009）。其它与胃癌发病相关的SNPs和患者临床特征，包括性别、年龄、肿瘤长径、肿瘤位置、临床分期、分化程度及脉管瘤栓等无关（P＞0.05）。结论：1胃癌患者mtDNA的D-Loop区是一个具有高度多态性的区域，多态性以单碱基置换、插入及缺失为主，主要分布于第Ⅰ高变区（HV1）和第Ⅱ高变区（HV2）。2mtDNA D-Loop区的SNPs与胃癌发病风险有关，73G、523-524Del及16519C基因型可能增加了胃癌的发病风险，309C insert及16362C基因型则可能降低了胃癌的发病风险。3D-Loop区的多态性改变与胃癌患者临床特征没有相关性，提示D-Loop区多态性变异可能是胃癌发生过程中的一个早期事件。D-Loop区作为mtDNA多态性的热点有望为胃癌早期诊断提供有效和敏感的分子标记。