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目的: 通过沉默MGC-803胃癌细胞株的CIP2A基因,观察CIP2A表达下调后对c-Myc蛋白表达及胃癌细胞增殖的影响。 方法: 1.通过Western blot检测正常胃粘膜细胞、胃癌细胞系MGC803及胃癌细胞系SGC7901中CIP2A蛋白的表达情况。 2.构建两组分别含有不同CIP2A干扰序列的质粒载体系统并对MGC-803细胞进行感染,将实验分组,分为空白对照组、CIP2A-shRNA1感染干扰组、CIP2A-shRNA2感染干扰组、空载体组,并用Western blot检测各组CIP2A蛋白表达及c-Myc蛋白表达情况,应用MTT比色法检测四组胃癌细胞株增殖情况,将实验数据进行统计学分析。 结果: 1.应用Western blot实验检测正常胃粘膜细胞、胃癌细胞系MGC803、胃癌细胞系SGC7901中CIP2A蛋白,结果显示正常胃粘膜细胞中CIP2A蛋白呈低表达状态,而胃癌细胞系MGC803及胃癌细胞系SGC7901中CIP2A蛋白呈高表达状态,差异具有统计学意义(p<0.05)。 2.成功地构建了2条CIP2A-shRNA序列。 3.分别用质粒介导的CIP2A-shRNA1、质粒介导的CIP2A-shRNA2及空载体质粒感染胃癌细胞MGC-803,检测到细胞的绿色荧光提示质粒成功感染了MGC803细胞,转染率约80%~90%。 4.将实验组分为4组,4组胃癌细胞经Western blot实验检测显示,CIP2A-shRNA1干扰组蛋白表达水平较未经处理的空白对照组相比呈下调状态,差异有统计学意义(p<0.05);同时CIP2A-shRNA干扰组蛋白表达水平较空载体质粒转染组相比呈低表达状态,差异有统计学意义(p<0.05);而转染空载体组的MGC803细胞与空白对照组相比,差异无统计学意义(p>0.05)。 5.MTT比色法检测结果显示,CIP2A-shRNA1干扰组第24小时及第48小时细胞增殖抑制率分别为26.66%、40.77%,CIP2A-shRNA2干扰组第24小时及第48小时细胞增殖抑制率分别为25.22%、40.42%,较未经处理的空白对照组相比两组干扰组的细胞增殖水平明显抑制,差异有统计学意义(p<0.05);同时空载体质粒转染组第24小时及第48小时细胞增殖抑制率分别为2.60%、7.77%,CIP2A-shRNA干扰组胃癌细胞增殖抑制率较空载体质粒转染组相比差异有统计学意义(p<0.05)。 结论: 1.胃癌细胞系中CIP2A蛋白表达呈高表达状态。 2.沉默CIP2A基因后下调C-Myc蛋白的表达。 3.沉默CIP2A基因后抑制胃癌细胞MGC803增殖。