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背景心肌梗死严重危害人类健康,干细胞治疗心肌梗死成为目前的研究热点,心肌干细胞(cardiac stem cells, CSCs)存在于胚胎和成体心脏组织内,具有典型的干细胞特性,即克隆性、自我更新与多向分化,在特定诱导条件下可以定向分化为血管平滑肌细胞、内皮细胞及心肌细胞。生长因子能有效地动员干细胞,增强干细胞黏附力与增殖力,研究表明肝细胞生长因子(HGF)和类胰岛素样生长因子(IGF1)能够诱导多种干细胞向心肌细胞分化,但其对心肌干细胞的作用报道甚少,本实验就此问题进行研究和探讨。目的探讨在体外,HGF和IGF1能否诱导心肌干细胞增殖并定向分化为心肌细胞,为临床应用心肌干细胞治疗心肌梗死提供必要的理论依据。方法采用改进的组织贴块法培养心肌干细胞,酶消化法原代培养心肌细胞(Mycardial cells, MC),免疫荧光技术鉴定心肌干细胞特异性表面标志物c-kit及血源性干细胞表面标志物CD34,流式细胞仪分选纯化得到c-kit+心肌干细胞,CFDASE绿色荧光探针示踪培养,检测心肌干细胞的增殖情况。实验分组：1.单纯心肌干细胞组：分为四组,①对照组：心肌干细胞,不添加生长因子；②IGF1组：CSCs+100μg/L IGFl;③HGF组：CSCs+20μg/L HGF；④HGF+IGF1组：CSCs+20μg/L HGF+100μg/L IGF1。2.心肌干细胞与心肌细胞共培养组：分为四组,①对照组：CSCs+MC,不添加生长因子；②IGF1组：MC+CSCs+100μg/L IGF1;③HGF组：MC+CSCs+20μg/L HGF;④HGF+IGF1组：MC+CSCs+20μg/L HGF+100μg/LIGF1。倒置显微镜观察细胞不同时期数量与形态的变化,活细胞工作站观察CFDA SE示踪剂荧光强弱,采集图像,进行统计学分析；免疫荧光技术鉴定心肌前体细胞早期标志物Nkx2.5,心肌细胞特异性标志Cardiac troponin T (cTnT)的表达,活细胞工作站采集图像,进行统计学分析。结果1.单纯心肌干细胞组：生长因子刺激后,倒置显微镜观察心肌干细胞数量与形态均无明显变化,仍保持小圆亮形态；培养5天,对照组心肌干细胞出现胞质发黑现象,之后细胞脱落漂浮,细胞大量死亡,其它三组培养无此现象,生长状态正常。活细胞工作站观察四组心肌干细胞CFDA SE荧光强度均一,无强弱变化,未发生增殖。2.心肌干细胞与心肌细胞共培养组：各组心肌干细胞均发生增殖与形态变化,倒置显微镜观察心肌干细胞形态由小圆亮变为短梭形,或胞体比较大的圆形；活细胞工作站下观察心肌干细胞CFDA SE荧光强度有强有弱,心肌干细胞发生增殖；四组心肌干细胞Nkx2.5、cTnT均呈红色阳性表达,HGF+IGF1组有心肌干细胞分化为自发搏动的心肌细胞。结论1.单纯添加生长因子,能够延长心肌干细胞的存活时间,但对心肌干细胞的增殖与分化无明显作用；2.与心肌细胞共培养条件下,肝细胞生长因子和类胰岛素样生长因子能够诱导心肌干细胞增殖,并分化为心肌细胞,但对自发性搏动的心肌细胞的诱导率是比较低的。