肾小球硬化(glomerular sclerosis,GS)是各种原因引起的肾小球损伤晚期的共同病理特征,是多种肾脏疾病进行性肾功能丧失的最后通路。从形态学来看,肾小球硬化乃细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)的降解平衡失调,过度积聚而致。肾小球的ECM成分主要由胶原蛋白(collagen,Col)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)三大类物质聚合组成。ECM对细胞的生理功能起着非常重要的作用,它不仅是细胞粘附及支持所必需的物质,而且直接影响细胞的营养、代谢、增殖、分化和迁移,许多细胞因子通过ECM对细胞的生长、增殖和分化起调控作用。肾小球内ECM的大量积聚是肾小球硬化的重要病理基础。因此,深入研究ECM对防治肾小球硬化有重要的意义。根据中医的“异病同治”理论,选用复方鳖甲软肝方(Compound Biejia Ruangan Prescription,CBJRP)进行防治肾小球硬化研究。复方鳖甲软肝方由鳖甲、赤芍、冬虫夏草、三七、紫河车、连翘、当归、莪术、党参、黄芪、板蓝根等11味中药组成,具有活血化瘀、软坚散结、益气养阴、清热解毒之功效。本文开展系列研究,旨在探讨探讨该方防治肾小球硬化的作用机制。目的本文采用5/6肾切除(5/6 nephrectomy,5/6NT)肾小球硬化大鼠模型,从整体动物实验水平证明复方鳖甲软肝方有确切的疗效后,进而从组织、器官、细胞、分子基因水平阐释该方的作用机理,以期为临床防治肾小球硬化提供准确、科学的实验依据。方法1.健康雄性SD大鼠共90只,体重200土20g,适应性喂养一周后,分为行5/6肾切除术,分为正常组10只、假手术组8只、模型组72只,两周后灌胃,模型组、苯那普利组、尿毒清组、复方鳖甲软肝方高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组12只。造模后,按组给予相应的中药治疗。期间每隔2周测大鼠体重,每隔4周测大鼠尿蛋白和血压。术后第15周取材,分离血清,测定其中BUN、Cr、Cho、TG、LDL的含量,肾组织做HE染色、六胺银染色、Mallory染色、Masson染色观察肾组织病理形态学变化。2.采用免疫组化法,检测5/6肾切除大鼠肾组织中FN和LN的含量,原位杂交的方法,检测5/6肾切除大鼠肾组织中ColⅣmRNA的表达。3.选用肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells,GMCs),通过LPS刺激后,给予大鼠的含药血清干预,MTT法检测GMCs在12h,24h,48h和60h的增殖。