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虎纹蛙病毒(Tigerfrogvirus，TFV)属于虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)，其全基因组序列在2002年完成测定。为了更好的研究病毒的结构以及病毒在感染过程、与宿主相互作用中涉及到的关键基因，我们通过蛋白质组学、基因组学和生物信息学分析的方法，筛选出了四个候选基因，ORF001L、ORF019R、ORF020R和OEF053R，作为我们的研究对象。四个基因在蛙病毒属里都比较保守，其中ORF001L和ORF020R生物信息学预测两个基因均有跨膜区，可能编码囊膜蛋白。为了鉴定这四个蛋白是否为病毒结构蛋白，我们首先将四个基因进行了克隆、原核表达。因为ORF019R表达困难，我们只对ORF001L、ORF020R、ORF053R制备了多克隆抗体。转录时相分析(transcriptional analysis)表明这三个基因均为晚期基因，与纯化病毒粒子的蛋白印迹(Western blot)显示这三个蛋白可能为结构蛋白。间接免疫荧光和感染细胞的蛋白组分检测表明ORF001L、ORF020R这两个病毒蛋白主要分布在胞质和待鉴定的膜结构上，免疫电镜的结果证实这两个蛋白均为病毒囊膜蛋白，而OR053R明确定位需要进一步鉴定。
为了进一步研究病毒蛋白的功能，我们进行了一系列的试验。抗体中和试验显示，ORF001L和ORF020R病毒蛋白的抗体都不能阻止病毒的感染，但是抗001L的抗体可以推迟上清病毒滴度高峰的出现。我们采用了RNA干扰(RNAi)技术对两个囊膜蛋白在病毒复制中的作用进行初步探讨。通过体外转录(invitrotranscription)的方法，合成了针对ORF001L和ORF020R的特异性siRNA，并通过与pEGFP-001和pEGFP-020真核质粒共转染的方法验证siRNA的特异性和有效性。把siRNA转染幼仓鼠肾(BHK)细胞，随后进行TFV感染。通过定期观察细胞病理变化(cytopathogenic effect，CPE)的方法，直接检测siRNA对病毒增殖的影响；应用半定量RT-PCR(Sq-RT-PCR)的方法进行基因表达分析，检测siRNA对基因表达水平的影响；同时应用病毒滴度(TCID50)测定的方法，检测新生的病毒量及其毒力。结果显示，这两个基因沉默以后对病毒的复制没有明显的影响，其在病毒侵染中的作用需要进一步研究。为了检测相互作用蛋白存在与否，我们使用pMAL-c2X表达载体获得了可溶性的MBP-001和MBP-020。将可溶性蛋白与细胞孵育后，再使用间接免疫荧光检测相互作用蛋白的存在。结果显示，MBP-020与源自人、鼠、鱼的细胞孵育，均能产生特异性的绿色荧光，说明了这种相互作用蛋白可能是一种普遍存在的受体。而MBP-001未见明显的绿色荧光，可能是相互作用蛋白丰度较低或蛋白活性不强。我们使用抗020R的多抗与MBP-020孵育后再感染，可以明显降低IFA，进一步说明这种相互作用蛋白的存在。