论文部分内容阅读
第一部分蜂毒肽对不同非小细胞肺癌细胞系的抑制作用目的:探讨蜂毒肽对不同非小细胞肺癌细胞系增殖、凋亡、迁移以及侵袭作用的影响。方法:以不同浓度(0.5、1、2、3、4、5μg/m L)的蜂毒肽干预非小细胞肺癌细胞系A549(EGFR野生型)、PC-9(EGFR-TKIs敏感)和N CI-H1975(EGFR-TKIs耐药),采用CCK-8法和流式细胞术检测蜂毒肽对非小细胞肺癌细胞系的增殖抑制作用和促进凋亡的影响;划痕实验和Transwell法检测蜂毒肽对迁移和侵袭的抑制作用;western blot法检测蜂毒肽对相关凋亡蛋白的影响。采用SPSS 21.0统计软件进行数据处理,计量数据以(?)±s表示,组间比较以单因素方差分析进行统计分析,LSD法进行各组间两两比较,检验水准α=0.05,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:蜂毒肽对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549、PC-9和NC I-H1975均显示明显的增殖抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);LSD法对三种肿瘤细胞的IC50值两两比较发现,相较于EGFR突变NSCLC细胞系(PC-9和NCI-H1975),蜂毒肽对EGFR野生型的A549细胞有更强的增殖抑制作用,IC50值更小;蜂毒肽可诱导NSCLC细胞凋亡,且随浓度增加诱导凋亡越明显(P<0.05);划痕实验结果显示,蜂毒肽作用后细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。Transwell小室结果显示,蜂毒肽对各细胞系的侵袭能力均具有显著抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,蜂毒肽处理组细胞Bax和Caspase3蛋白表达呈现上升趋势,Bcl-2蛋白表达呈现下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。小结:蜂毒肽可明显抑制不同类型非小细胞肺癌细胞系的增殖并诱导其凋亡。蜂毒肽对不同类型非小细胞肺癌细胞系迁移与侵袭具有抑制作用。同时其诱导肿瘤细胞凋亡作用可能与升高Bax和Caspase3蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达有关。第二部分蜂毒肽联合埃克替尼对不同非小细胞肺癌细胞协同抑制作用的研究目的:观察蜂毒肽联合埃克替尼对肺腺癌细胞抑制作用的影响及蜂毒肽逆转肺腺癌耐药细胞株NCI-H1975对埃克替尼的耐药作用,探讨克服耐药的可能作用机制。方法:以蜂毒肽(2μg/m L)、埃克替尼(1μM)及两药联合方式干预非小细胞肺癌细胞系PC-9(EGFR-TKIs敏感)和NCI-H1975(EGFR-TKIs耐药),应用CCK-8法检测不同干预方式对非小细胞肺癌细胞系的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同干预方式对非小细胞肺癌细胞系促凋亡作用的影响;划痕实验和Transwell法检测不同干预方式对非小细胞肺癌细胞系的迁移和侵袭抑制作用的影响;western blot法检测蜂毒肽、埃克替尼及联合使用对不同非小细胞肺癌细胞系凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase3蛋白表达水平的影响。采用SPSS 21.0统计软件进行数据处理,计量数据以(?)±s表示,组间比较以单因素方差分析进行统计分析,LSD法进行各组间两两比较,检验水准α=0.05,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:在肺腺癌细胞PC-9和NCI-H1975中,CCK-8检测结果显示,与单药组及空白对照组相比,联合用药组细胞增殖能力明显减弱;流式细胞术结果显示,联合组细胞凋亡率明显高于另外三组,提示联合用药组较单药组更能诱导细胞发生凋亡;迁移实验和Transwell侵袭实验结果显示,联合组细胞迁移和侵袭能力明显减弱,与对照组和单药组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,不同处理组Bax、Caspase3蛋白表达量均有不同程度的升高,Bcl-2蛋白表达量下降,且与另外三组相比联合组Bax、Caspase3蛋白表达量明显升高,Bcl-2表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。小结:蜂毒肽联合埃克替尼能明显抑制肺癌细胞株PC-9和NCI-H1975的增殖、迁移和侵袭能力,以及更高的细胞凋亡率;且联合组对NSCLC细胞系具有更明显的抑制作用。而对于埃克替尼耐药的NCI-H1975细胞,在加入蜂毒肽(2μg/m L)与埃克替尼(1μM)联合用药后,联合组的抑制率与蜂毒肽单药组相比明显提高。该结果显示蜂毒肽与埃克替尼联合使用后可以恢复耐药细胞株对埃克替尼的药物敏感性。结论:1.蜂毒肽可明显抑制不同类型非小细胞肺癌细胞系的增殖并诱导其凋亡。蜂毒肽对不同类型非小细胞肺癌细胞系迁移与侵袭具有抑制作用。2.蜂毒肽联合埃克替尼可明显抑制肺腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭作用,以及促进肿瘤细胞凋亡。且在PC-9和NCI-H1975细胞中联合组的抑制作用较单药组更明显。而对埃克替尼耐药的NCI-H1975细胞,埃克替尼组没有显示出明显的抑制作用,但当加入蜂毒肽与埃克替尼联合应用后,联合组的抑制率明显高于单药组。结果表明,蜂毒肽与埃克替尼联合可恢复耐药细胞系对埃克替尼的药物敏感性。