表皮生长因子mRNA在猪雌性生殖器官中的表达

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EGF不仅对上皮细胞,而且对许多类型的细胞均有促增殖的作用,是与细胞的生长与分化有关的重要生长因子。在雌性哺乳动物的生殖过程,包括卵泡的发育,卵母细胞的成熟,合子的形成,早期胚胎发育,胚胎着床及子宫蜕膜化,妊娠的维持及分娩等过程中,EGF都起者十分重要的作用。进一步掌握猪雌性生殖器官,包括卵巢、输卵管及子宫中,EGF随生殖周期的变化而变化的规律,对哺乳动物卵子的体外成熟、体外受精、胚胎的体外发育、胚胎移殖和雌性哺乳动物生殖系统疾病的治疗都有十分重要的意义。 为了研究EGF在猪雌性生殖器官中的作用,我们选择了反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测了EGF的mRNA在猪卵巢、输卵管和子宫中的表达情况。结果发现:猪卵母细胞中EGF的mRNA强烈表达,且小卵泡卵母细胞→中卵泡卵母细胞→大卵泡卵母细胞中,EGF的mRNA表达量有逐渐减少的趋势;猪卵泡的颗粒细胞中有EGF的mRNA表达,小卵泡颗粒细胞→中卵泡颗粒细胞→大卵泡颗粒细胞中,EGF的mRNA表达也有逐渐减少的趋势;猪卵巢中的红体、黄体、白体和假黄体中都有EGF的mRNA表达,看不出几部分的表达量有明显的强弱变化;猪输卵管伞部、壶腹部和峡部,都有EGF的mRNA表达,在大卵泡期,排卵期,孕期和假孕期都强烈表达,各期间看不出明显的强弱变化,中卵泡期表达较弱;猪子宫中EGF的mRNA在大卵泡期,排卵期,孕期和假孕期都强烈表达,看不出表达量的明显变化,而小卵泡期表达量明显减弱。我们推测输卵管和子宫中的EGF在发情期和孕期可能是控制性表达或有其它方式调节其中的EGF含量。同时发现,反转录体系中dNTP浓度为1mM,Mgcl2浓度为2.5mM,PCR时dNTP浓度为0.3mM,Mgcl2浓度为0.75mM时较为合适,若Mgcl2浓度达到或超过1.0mM就会出现非特异性条带;5%的甘油和二甲基亚砜加入PCR体系能降低解链和链分离温度,促进PCR反应的进行。
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