论文部分内容阅读
巨噬细胞是一类具有高度可塑性的免疫细胞群体,它们可以吞噬和清除侵入机体的病原体微生物,促进机体的炎症反应以及损伤组织的修复和重建。在生物体所处的特定微环境中,巨噬细胞可以极化出不同的表型,即经典活化的M1型巨噬细胞和选择性活化的M2型巨噬细胞。通常在病原体感染的早期,巨噬细胞被激活极化成M1型巨噬细胞,然后产生大量的促炎介质,例如IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(iNOS)等;同时也可以产生趋化因子,例如单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、CCL2-4、CXCL8-11等。如果炎症持续发生将会产生大量的炎性因子,巨噬细胞又会极化成M2型巨噬细胞分泌抗炎因子,例如Arg-1,IL-10等,从而缓解机体炎症反应。鞘氨醇-1-磷酸(S1P)是鞘磷脂代谢产生的一种生物活性脂类,广泛存在于血液和淋巴液中,S1P作为细胞外配体,与几乎存在于所有细胞种类的S1P膜受体结合,激活一系列下游信号通路产生重要生理功能,例如参与细胞增殖,细胞迁移,细胞凋亡,血管生成,和免疫反应等生物学作用。本实验以小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7作为实验材料,探究了S1P对RAW264.7细胞相关细胞因子的基因表达和蛋白生成的影响。首先,使用MTT法检测不同浓度的S1P对RAW264.7细胞增殖活性的影响,结果显示20~500 nmol/L S1P处理RAW264.7细胞24 h,对RAW264.7细胞体外增值活性没有影响,并且在500 nmol/L浓度时细胞活性最强。其次,探究RAW264.7细胞上S1P受体的表达情况,将巨噬细胞用LPS(1.0μg/mL)刺激极化成M1型巨噬细胞以后提取细胞总RNA,然后进行qRT-PCR检测,结果显示RAW264.7细胞表达S1PR1,S1PR2,S1PR4受体。在探究S1P对LPS(1.0μg/mL)刺激的RAW264.7细胞极化成M1型巨噬细胞的影响中,使用500 nmol/L S1P处理M1型巨噬细胞之后,收集细胞并提取总RNA和蛋白质,运用实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)检测TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS、Arg-1和IL-10的基因表达情况,运用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS、Arg-1和IL-10的蛋白生成情况。结果表明500 nmol/L S1P可以抑制RAW264.7细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6、MCP-1和iNOS的基因表达,降低它们蛋白的生成;并且可以增强抗炎细胞因子Arg-1和IL-10的基因表达和升高蛋白的合成。由上述结果可以初步推论,一定浓度的S1P可以抑制M1型巨噬细胞的促炎因子的分泌,增强抗炎因子的分泌,因此S1P作为细胞外源物质具有一定的抗炎效果,而慢性疾病对人类健康的威胁不可小觑,很多慢性疾病大多与炎症有着不可分割的关系,这为缓解机体炎症以及一些慢性炎症疾病提供了新的研究思路。