【摘 要】
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目的:1.分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs),观察其生理学特性;2.体外诱导rMSCs,促其向神经方向分化并予以鉴定,验证其多能分化特性;3.对诱
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目的:1.分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs),观察其生理学特性;2.体外诱导rMSCs,促其向神经方向分化并予以鉴定,验证其多能分化特性;3.对诱导后细胞进行超微结构观察和电生理特性初步探讨.方法:1.取2月龄Wistar大鼠,获取股骨和胫骨骨髓悬液,Percoll液密度梯度离心与贴壁相结合分离、纯化rMSCs,进行培养.2.采用含10ng/ml的bFGF及20％FBS的L-DMEM作为诱导前液,对第5、10、15代rMSCs进行预诱导24h,再以含2％ DMSO+200 μ mol/L BHA的无血清L-DMEM作为诱导液对rMSCs进行诱导,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞形态变化,对诱导后细胞进行尼氏染色,用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞标志神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)神经丝蛋白(NF)、微管联合蛋白-2(MAP2)及星形胶质细胞特异性标志胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,记数诱导前后NESTIN、NSE、NF、MAP2、GFAP阳性细胞数,计算均值和标准差.3.对第5代rMSCs诱导后细胞,进行透射电镜观察其超微结构特点;用全细胞膜片钳技术检测诱导后细胞的静息电位(rest potential,Rp)和全细胞电流(whole cell currents),对诱导后细胞的电生理特性进行初步探讨.
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