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凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),俗称南美白对虾,是我国最主要的养殖对虾。凡纳滨对虾是一种广盐性的对虾,对盐度耐受范围广,可以在海水、咸淡水甚至在淡水中成活。凡纳滨对虾能够在不同的盐度中成活,这与其强大的渗透压调节能力有着密切的关系,因此深入研究渗透压调节基因,对阐明渗透压调节分子机制和选育耐低盐品种具有重要作用。水孔蛋白(aquaporin,AQP)是渗透压调节过程中的一种关键蛋白,本文围绕凡纳滨对虾水孔蛋白-4基因(LvAQP4)进行了以下研究: 1.通过RACE方法,首次从凡纳滨对虾中克隆到LvAQP4的全长cDNA序列。获得的LvAQP4 cDNA序列全长为1048bp,其中包括75bp的5UTR,187bp的3 UTR和786bp的ORF。根据ORF序列推导出LvAQP4编码261个氨基酸,预测其分子量为27.85kDa,等电点为8.11。推导的氨基酸序列与其它甲壳动物的AQP相似度为48.8%到97.3%。进化分析显示LvAQP4属于AQP1-like亚族、AQP4类。 2.阐述了LvAQP4在组织和细胞中的分布情况。实时荧光定量PCR结果表明,LvAQP4在不同组织中均有表达,其中鳃的表达量最高,其次为肌肉、脑、眼柄和肝胰腺,而血淋巴、肠、胃和胸神经节中表达量则较低。原位杂交结果显示,LvAQP4在鳃上皮细胞中广泛表达。亚细胞定位结果显示,LvAQP4在胞内广泛表达。 3.在活体内研究了凡纳滨对虾鳃和肝胰腺LvA QP4 mRNA在高盐(40‰)和低盐(4‰)刺激下的表达模式。在高盐条件下,凡纳滨对虾鳃LvAQP4表达量先降低后升高,而肝胰腺LvAQP4表达量则先升高后降低,并恢复到刺激前水平。在低盐条件下,凡纳滨对虾鳃LvAQP4表达量先降低后升高最后又恢复刺激前水平,而肝胰腺LvAQP4表达量无显著变化。结果表明:LvAQP4与凡纳滨对虾渗透压调节相关,但在鳃和肝胰腺中表达模式有差异。 4.在体外高渗条件下,研究了凡纳滨对虾鳃孵育碎片和肝胰腺原代细胞LvAQP4的表达模式。结果发现,NaCl和蔗糖高渗条件都能增加LvAQP4表达量,但NaCl较蔗糖更为明显。结果表明:体外高渗条件能增加LvAQP4表达量。