蜣螂抗良性前列腺增生作用机制与基于自身的壳聚糖给药载体研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jimmycjriyue
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第一部分基于本草挖掘的蜣螂活血化瘀抗良性前列腺增生的作用机制研究  目的:整理挖掘蜣螂本草文献,探讨蜣螂活血化瘀治疗大鼠前列腺增生的效应及其作用机制。方法:通过计算机与手工检索历代100余本本草,分门别类收集甄选记载蜣螂的文献,利用聚类分析法对其功能主治进行数据挖掘;继而采用丙酸睾酮致良性前列腺增生模型,检测大鼠体重和前列腺湿重,计算前列腺指数,观察腺体组织形态变化;采用化学发光免疫法检测大鼠血清睾酮、雌二醇水平;采用免疫组化法检测前列腺组织表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其信号通路蛋白 smad3、凋亡抑制基因(bcl-2)、凋亡诱导基因(bax)、增殖细胞核抗原ki-67的表达情况;同时采用CCK-8法研究蜣螂乙醇提取物对人脐静脉内皮细胞 EA.hy926增殖的影响。结果:将本草文献作为一组进行共词聚类分析,以蜣螂各“功能主治”为对象,按中医辨证理论将各功能主治归到蜣螂相应的功效中,再利用数理统计知识,计算得蜣螂破瘀散结功效的频率为91%,表明蜣螂具有良好的破瘀散结之功,能够治疗前列腺增生。实验表明,蜣螂可降低模型大鼠前列腺湿重与前列腺指数,改善腺体上皮及间质组织增生形态,降低血清中雌二醇水平及间接下调二氢睾酮水平,调节雌/雄激素比例,降低组织中EGF、bFGF、VEGF、bcl-2、ki-67表达水平,上调 TGF-β1、Smad3、bax表达水平,降低 EA.hy926细胞活力,抑制细胞增殖。结论:蜣螂通过破瘀散结来促进组织消散与细胞凋亡,从而抑制上皮细胞、血管内皮细胞、间质细胞增殖,使模型动物前列腺腺体缩小、缓解上皮及间质增生。整体而言,蜣螂可能通过影响性激素水平、调节生长因子及细胞增殖凋亡调控基因而抑制前列腺增生,表明采用数据挖掘技术对本草资料进行定量处理以实现对中药现代研究的系统和具体指导有很强的可行性和实用性。  第二部分蜣螂壳聚糖给药载体研究  目的:以蜣螂提取多肽后的药渣为原料提取壳聚糖,并对其进行理化与药剂学表征,探索蜣螂壳聚糖作为新型结肠定位给药载体的可行性。方法:采用单因素试验法与正交试验法优选甲壳素与壳聚糖的制备工艺,并利用用红外光谱(IR)、X射线衍射(XRD)、核磁共振谱(NMR)、电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)、热重分析、流变仪、紫外-可见分光光度计等检测手段对壳聚糖进行表征,从脱乙酰度、结晶性、重金属含量、粘度、蛋白残留量、灰分、体外粘附力等方面比较蜣螂壳聚糖与市售医药级虾壳聚糖的性能优劣,同时从膜的形态结构、耐酸性、透湿性、透光性、酶解性、溶胀性、力学性能等方面考察壳聚糖作为结肠定位给药辅料的适宜性。结果:筛选得到壳聚糖的较佳制备工艺条件:脱矿物质用1.3 mol?L-1 HCl以固液比1:30预先80℃加热30 min,然后室温条件下浸泡12 h;脱蛋白质和脂质用4 mol?L-1 NaOH以固液比为1:30,在90℃条件下处理6 h;脱色用15%双氧水以固液比为1:15,在pH为10-11下常温处理15 min;脱乙酰基用19 mol?L-1 NaOH以固液比为1:20,在90℃间歇处理7 h。所得蜣螂壳聚糖在脱乙酰度、粘附性、流变性、重金属残留量等多方面优于市售医药级虾蟹壳聚糖,且制成的壳聚糖膜外观透明,厚薄均匀,透湿性小,有一定的耐酸性,机械性能及综合性能好,同时初步显示蜣螂壳聚糖可能是以壳聚糖/甲壳素与黑色素构成的复合物形式存在。结论:蜣螂壳聚糖的制备工艺稳定可行,且从蜣螂药渣中制备的壳聚糖在理化特性与药剂学特性方面均优于市售虾壳聚糖,适合作为新型结肠定位给药载体。
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