极低频电磁场对眼巩膜及成纤维细胞的作用

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目的:研究日益广布的极低频电磁场(ELF-EMFs)对豚鼠眼球与其后极部巩膜和人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)的作用以及葛根素对受辐射HFSFs的保护作用。  方法:自制模拟日常的ELF-EMFs辐照系统,研究分三部分进行。  第一部分:ELF-EMFs对豚鼠眼球的影响。  将豚鼠置于ELF-EMFs中接受辐射,在作用的0、2、4、8周检测其眼球屈光度、眼轴长度,对眼后极部巩膜行光镜和电镜检查。  第二部分:ELF-EMFs对HFSFs的作用。  将HFSFs置于ELF-EMFs中培养。检测HFSFs形态学和细胞增殖活力变化。用Real Time PCR方法测定HFSFs的Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、转化生长因子beta-2(TGFβ-2)、成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)的mRNA表达。通过间接免疫荧光和western blot法检查COL1A1和MMP-2在HFSFs中的表达。  第三部分:葛根素对ELF-EMFs引起的HFSFs病理改变的作用。  观察葛根素对ELF-EMFs引起的HFSFs增殖活性、COL1A1和MMP-2表达变化的影响。  结果:  第一部分:  在经过ELF-EMFs作用后,与对照组比较实验组豚鼠眼轴增长幅度、屈光度下降幅度明显(P<0.05)。结合光镜与电镜结果可知巩膜纤维排列紊乱,小直径纤维数量增多,视网膜内外核层在形态学上发生明显变化,且其损伤程度与照射时间相关。  第二部分:  在ELF-EMFs(0.2mT、50Hz)作用24小时后,HFSFs的形态学发生变化,细胞呈不规则多边形异常排列;HFSF细胞的增殖率在辐射后明显降低。ELF-EMFs辐射后HFSFs的COL1A1、TIMP-2和FGF-2的mRNA表达水平明显下降,MMP-2和TGFβ-2的mRNA表达水平明显上调;辐射后COL1A1和MMP-2的蛋白质表达也有相应的变化,即COL1A1蛋白明显下降而MMP-2蛋白明显增加(p<0.05)。  第三部分:  葛根素能够减缓ELF-EMFs对HFSFs增殖的抑制作用,延阻ELF-EMFs使HFSFs内COL1A1 mRNA和蛋白的表达下调、MMP-2 mRNA和蛋白表达上调的作用。  结论:  ELF-EMFs可促使豚鼠眼轴增长、屈光度负降,使豚鼠巩膜和HFSFs发生形态学改变,是导致HFSFs增殖能力下降、COL1A1和MMP-2异常水平表达的一个诱发因素;葛根素可保护性对抗ELF-EMFs对HFSFs的病理作用。由ELF-EMF辐射导致的这些病理性变化是诠释以眼后极部改变为主要特征的眼部疾病发生率增加的一个可能因素。
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