拟南芥编码短肽激素基因组织特异性表达以及对茉莉酸和水杨酸的响应

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AtPROPEP是拟南芥有七个成员的基因家族,编码内源短肽激素。AtPROPEP基因家族编码的蛋白质,其C端23个左右的氨基酸短肽意义重大,能够被两个同源激酶受体AtPEPR1和AtPEPR2识别并结合,引起下游反应。然而对于家族各成员的组织表达是否具有特异性并不清楚,  本研究将AtPROPEP1,AtPROPEP2, AtPROPEP3,AtPROPEP4, AtPROPEP5, AtPROPEP6的启动子克隆到双元表达载体pORE R1中β-葡萄糖醛酸酶报告基因(GUS)的上游,形成Promoter AtPROPEP∷GUS融合基因,先前的研究表明在拟南芥中并未发现有AtPROPEP7的转录产物。通过农杆菌侵染拟南芥野生型花序,多代筛选,获得稳定表达此融合基因的拟南芥T3转基因种子。通过β-葡萄糖苷酸酶活性的组织化学染色法,对这些来自T3转基因幼苗进行了分析,发现AtPROPEP1和AtPROPEP4主要在根尖表达,AtPROPEP2,AtPROPEP3和AtPROPEP6在叶片和根中均表达,AtPROPEP5只在叶片表达。分别用茉莉酸(jasmonic acid,JA),水杨酸(salicylic acid,SA)处理后再进行上述β-葡萄糖苷酸酶活性的组织化学染色,发现JA促进AtPROPEP2,AtPROPEP3的表达,SA促进AtPROPEP1,AtPROPEP2,AtPROPEP3和AtPROPEP4的表达,两者都抑制AtPROPEP6的表达。除此之外,我们还进行的过量表达的研究,分别将AtPROPEP3,AtPROPEP4编码序列克隆到双元表达载体pRI101中35S启动子的下游,形成35S∷AtPROPEP3,35S∷AtPROPEP4融合基因。通过上述方法获得稳定表达此融合基因的拟南芥T3转基因种子。我们对比拟南芥野生型Col-0与上述转基因植株在MQA培养基上的表型,发现转基因植株的根比Col-0的长。本实验揭示了AtPROPEP基因家族六个成员的组织表达存在特异性,并且各成员对JA和SA有的不同响应,另外本研究还发现了AtPROPEP3,AtPROPEP4对于拟南芥根的生长有促进作用。
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