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阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,临床表现为进行性记忆和认知功能障碍.患者发生最早也最重要的病理改变是基底前脑胆碱能神经元的变性、丢失,胆碱能标志物胆碱乙酰基转移酶 (cholineacetyl-transferase,CHAT)活性降低,神经递质乙酰胆碱 (acetylcholine,ACh)释放减少,受体功能异常,因此改善胆碱神经元的功能对AD的治疗有重要意义.目前临床对AD的药物治疗主要是使用胆碱酯酶抑制剂和M受体激动剂对症治疗改善轻、中度AD患者症状,对重度患者效果甚微,且长期疗效差,副作用严重,寻找和开发治疗AD的安全有效药物一直是AD研究的重要方向.
中医对AD等记忆障碍性疾病有独到的见解,认为本病患者多为肾阴虚证,因此滋阴药在治疗AD的方剂中常用,其中知母和地黄最常用到.多年来我们科室对知母抗 AD 活性成分知母皂苷元(sarsasapogenin,ZMS)及其 25 位异构体异菝葜皂苷元 (smilagenin,SMI)的神经保护作用及作用机制进行了系统的研究.地黄抗AD的活性成分尚不明确,其活性成分以环烯醚萜类为主,而梓醇在地黄环烯醚萜类中含量最高,是中国药典指定的地黄质量鉴定指标.近年来梓醇的神经保护作用研究较多.
本课题在动物模型实验的基础上,从细胞水平进一步观察了梓醇的胆碱神经保护作用,并对其作用机制进行了初步探讨.放射配基结合分析研究结果表明,梓醇终浓度1×10<-5>mol/l、1×10<-4> mol/l能上调衰老CHOm2细胞和L-Glu损伤PC12细胞下降的M受体密度,却不影响胆碱酯酶活性,也不与M受体位点结合；对Aβ<,25-35>损伤神经元样PC12细胞制作的AD细胞模型,MTT分析发现梓醇能增加其存活率,免疫细胞化学和放射酶分析测定ChAT活性、RT-PCR分析ChAT mRNA表达等方法检测结果显示梓醇对模型细胞降低的ChAT活性及ChAT mRNA表达有改善作用,终浓度达1×10<-4>mol/1时神经保护作用显著.提前1h加入神经营养因子高亲和力受体trk的特异性阻断剂K252a干预梓醇的作用,发现其胆碱神经保护作用减弱,但没有完全消失,说明梓醇的作用部分通过神经营养因子途径实现；针对Ap<,25-35>毒性作用以诱导细胞凋亡为主,而梓醇对其毒性有对抗作用,进一步的实验用TUNEL法测细胞凋亡率、RT-PCR测凋亡相关因子Bax、Bcl-2的mRNA表达,结果发现梓醇1×10<-4>mol/l有明显抗Aβ<,25-35>诱导PC12细胞凋亡作用,提示梓醇胆碱神经保护作用机制与其抗细胞凋亡作用有关.
上述实验结果表明梓醇具有明显胆碱神经保护作用,其与目前临床所用药物不同之处在于,既不是胆碱酯酶抑制剂,又不是M受体激动剂或阻断剂,很可能成为一类新的抗AD药物.从研究结果来看,梓醇作用较弱,终浓度达到1×10<-4>mol/l才对细胞有显著的改善作用,且临床用药以熟地黄滋阴作用更强,而熟地黄中梓醇含量明显减少,有些梓醇结构类似物含量却明显增加,推测某些梓醇结构类似物的滋阴作用可能更强,因此梓醇有望成为开发抗AD新药的先导化合物。