金黄色葡萄球菌是一种人兽共患病病原体，属于革兰阳性球菌，广泛存在于自然界，可以引起人和其他动物的各种疾病。目前检测金黄色葡萄球菌方法有很多，但这些方法大都比较费时费力，且价格昂贵。目的：建立一种检测金黄色葡萄球菌的简单、快速、灵敏、准确的方法。使用该方法检测实验动物是否感染金黄色葡萄球菌，并且与传统检测方法进行比较，探讨该方法的可行性。方法：1.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶nuc基因，设计一对通用引物及两条特异性探针，探针使用多聚物进行加尾。用生物素标记通用引物的5’端，使用该引物进行PCR扩增，获得用于杂交的目的片段。２.将两条特异性探针固定于硝酸纤维膜上，使PCR产物与探针杂交。设计优化实验，对探针的修饰及浓度、杂交条件、洗脱条件、抗体浓度等进行优化，筛选得到最佳反应条件，用于金黄色葡萄球菌的检测。3.使用建立的反向线性杂交方法方法对重庆地区74只实验动物进行金黄色葡萄球菌的检测，同时使用传统方法对这些样本进行检测，比较两种方法的一致性。结果：1.选择金黄色葡萄球菌的保守序列设计了引物及特异性探针，成功构建了nuc基因的重组质粒。2.优化后的最佳杂交反应条件为：探针进行15C多聚加尾，探针浓度为50μmol/L，采用紫外交联及高温烘烤的方式固定探针。生物素-碱性磷酸酶抗体稀释倍数为1：5000。37℃杂交60min，并用洗脱液（0.5×SSC，0.1%SDS）在50oC洗脱15min，使用碱性磷酸酶催化NBT/BCIP的方式进行显色。3.建立的反向线性杂交探针方法，其检测限为2ng/μL，检测特异性为100%。对于重庆地区74例实验动物的检测中，未发现金黄色葡萄球菌感染的情况，与传统方法的一致性为100%。结论：建立的反向线性杂交检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测，适合推广使用。