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麦角科的麦角菌属真菌是麦角碱的主要生产者,Claviceps paspali是其中重要的一类麦角菌,其主要代谢产物是麦角酰胺类生物碱。鉴于麦角碱在毒理学和药理学等方面的重要作用,目前广泛应用于现代医药。麦角碱与血清素、多巴胺受体和肾上腺素受体一起作用于中枢神经系统,主要用于治疗产后出血、抗高血压、帕金森症和抑制垂体激素分泌等。目前,国内的麦角资源较少,同时麦角菌种的严重退化等问题导致无法大规模发酵麦角菌获得麦角碱,因而麦角碱类药物的来源依然依赖于进口。本课题以实验室保藏的Claviceps paspali为材料进行筛选和选育。建立了Claviceps paspali的高通量筛选法,通过24孔板高通量筛选法和摇瓶筛选法筛选到了一株产碱量较高且产碱较稳定的菌株C6,菌株产碱量为101.33 μg/mL。本研究以C6菌株为出发菌株进行化学诱变育种,诱变剂选取吖啶橙、硫酸二甲酯和MNNG,诱变育种后各挑选120株菌株进行24孔板高通量筛选。其中MNNG诱变育种筛选到一株产孢菌株C6-28,且该菌株传代稳定性较好,与C6菌株相比产碱量提高了约50%。对C6-28菌株进行种子和发酵条件考察,并尝试采用Plackttt-Burman实验对发酵培养基进行条件优化。研究确定了最适种子生长时间、孢子接种量、种子接种量和发酵时间,同时确定M培养基为种子培养基,M2培养基为发酵培养基。本研究以产孢的C6-28菌株为材料,诱变材料为该菌株的孢子,对孢子进行计数从而达到定量诱变效果。经过四次MNNG诱变育种,筛选到高产菌株B3-24,菌株产碱量为815.5μg/mL,与出发菌株C6相比产碱量提高约8倍。该菌株菌丝体粗壮,分节明显,多为串珠状菌丝,这与高产菌株的显微形态描述相一致。研究结果表明用MNNG 对 Claviceps paspali菌株的孢子进行诱变育种效果较好。F33菌株的诱变育种,筛选出5种不同形态的诱变菌株,采用改进的氯化苄法提取这六种不同形态菌株的DNA。利用RAPD技术对六种不同形态的菌株进行多态性分析,根据RAPD扩增结果构建菌株的聚类分析树状图,从基因水平进一步研究各菌株之间的差异性。